प्रोपियोनिक एसिड (पीपीए), एक एंटीफंगल एजेंट अऊर आम आहार योजक, चूहों मा जठरांत्र संबंधी शिथिलता के साथ असामान्य न्यूरोडेवलपमेंट का कारण बनत देखा गा है, जवन आंत डिसबायोसिस के कारण हो सकत है। आहार पीपीए जोखिम अऊर आंत माइक्रोबायोटा डिसबायोसिस के बीच एक कड़ी सुझावा गा है, लेकिन सीधे जांच नाहीं कीन गा है। हिंया, हम आंत माइक्रोबायोटा संरचना मा पीपीए-संबंधित परिवर्तनन के जांच किहिन जवन कि डिस्बायोसिस का जन्म दे सकत हैं। एक अनुपचारित आहार (n=9) अऊर एक पीपीए-समृद्ध आहार (n=13) खिलाए गए चूहों के आंत माइक्रोबायोम का माइक्रोबियल संरचना अऊर जीवाणु चयापचय मार्गन मा अंतर का आकलन करै के लिए लंबी दूरी के मेटाजेनोमिक अनुक्रमण का उपयोग कइके अनुक्रमित कीन गा रहा। आहार पीपीए कई बैक्टीरॉइड्स, प्रीवोटेला अऊर रुमिनोकोकस प्रजाति सहित महत्वपूर्ण करन के बहुतायत मा वृद्धि से जुड़ा रहा, जेकर सदस्य पहिले पीपीए उत्पादन मा फंसाए गए हैं। पीपीए-उजागर चूहों के माइक्रोबायोम मा लिपिड चयापचय अऊर स्टेरॉयड हार्मोन जैव संश्लेषण से संबंधित अधिक मार्ग भी रहे। हमार परिणाम बतावत हैं कि पीपीए आंत माइक्रोबायोटा अऊर ओसे जुड़े चयापचय मार्गन का बदल सकत है। ई देखे गए बदलाव ई बात का उजागर करत हैं कि खपत के लिए सुरक्षित के रूप मा वर्गीकृत संरक्षक आंत माइक्रोबायोटा के संरचना अऊर बदले मा मानव स्वास्थ्य का प्रभावित कर सकत हैं।
मानव माइक्रोबायोम का अक्सर "शरीर का अंतिम अंग" कहा जात है अऊर ई मानव स्वास्थ्य मा एक महत्वपूर्ण भूमिका निभात है (बाकेरो अऊर नोम्बेला, 2012)। विशेष रूप से, आंत माइक्रोबायोम का अपने सिस्टम-व्यापी प्रभाव अऊर कईयो आवश्यक कार्यन मा भूमिका के लिए पहचाना जात है। आंत मा कॉमेन्सल बैक्टीरिया बहुतायत मा होत हैं, जवन कई पारिस्थितिक आला पर कब्जा करत हैं, पोषक तत्वन का उपयोग करत हैं अऊर संभावित रोगजनकों से प्रतिस्पर्धा करत हैं (जांध्याला एट अल., 2015)। आंत माइक्रोबायोटा के विविध जीवाणु घटक विटामिन जइसन आवश्यक पोषक तत्वन का उत्पादन करै अऊर पाचन का बढ़ावा देय मा सक्षम हैं (रोलैंड एट अल।, 2018)। जीवाणु चयापचय ऊतक विकास का प्रभावित करै अऊर चयापचय अऊर प्रतिरक्षा मार्गन का बढ़ावै के लिए भी देखा गा है (हेइजट्ज एट अल।, 2011; यू एट अल।, 2022)। मानव आंत माइक्रोबायोम के संरचना बहुत विविध है अऊर आनुवंशिक अऊर पर्यावरणीय कारकन जइसे कि आहार, लिंग, दवाइयन अऊर स्वास्थ्य स्थिति पर निर्भर करत है (कुंभरे एट अल., 2019)।
मातृ आहार भ्रूण अऊर नवजात शिशु के विकास का एक महत्वपूर्ण घटक है अऊर यौगिकन का एक संभावित स्रोत है जवन विकास का प्रभावित कर सकत है (बाजर एट अल., 2004; इनिस, 2014)। ब्याज का एक अइसन यौगिक प्रोपियोनिक एसिड (पीपीए) है, जवन जीवाणु किण्वन अऊर एक खाद्य योजक से प्राप्त एक छोट-श्रृंखला फैटी एसिड उप-उत्पाद है (डेन बेस्टन एट अल।, 2013)। पीपीए मा जीवाणुरोधी अऊर कवक रोधी गुण होत हैं अऊर यहिसे खाद्य संरक्षक के रूप मा अऊर औद्योगिक अनुप्रयोगन मा मोल्ड अऊर जीवाणु विकास का रोकै के लिए उपयोग कीन जात है (वेमेनहोव एट अल।, 2016)। पीपीए के अलग-अलग ऊतकों मा अलग-अलग प्रभाव होत हैं। यकृत मा, पीपीए मा मैक्रोफेज मा साइटोकाइन अभिव्यक्ति का प्रभावित कइके विरोधी भड़काऊ प्रभाव होत है (कावासो एट अल।, 2022)। ई नियामक प्रभाव अन्य प्रतिरक्षा कोशिका मा भी देखल गै है, जेहिसे सूजन का डाउनरेगुलेशन होत है (हासे एट अल।, 2021)। हालांकि, दिमाग मा विपरीत प्रभाव देखल गै है। पिछले अध्ययनन से पता चला है कि पीपीए के संपर्क मा आवै से चूहों मा आत्मकेंद्रित जइसन व्यवहार पैदा होत है (एल-अंसारी एट अल., 2012)। अन्य अध्ययनन से पता चला है कि पीपीए ग्लियोसिस का प्रेरित कर सकत है अऊर मस्तिष्क मा प्रो-इंफ्लेमेटरी मार्गन का सक्रिय कर सकत है (अब्देली एट अल।, 2019)। काहे से कि पीपीए एक कमजोर अम्ल है, ई आंत के उपकला के माध्यम से रक्तप्रवाह मा फैल सकत है अऊर एह तरह रक्त-मस्तिष्क बाधा के साथ-साथ नाल सहित प्रतिबंधात्मक बाधाओं का पार कर सकत है (स्टिन्सन एट अल., 2019), बैक्टीरिया द्वारा उत्पादित एक नियामक चयापचय के रूप मा पीपीए के महत्व का उजागर करत है। यद्यपि आत्मकेंद्रित के लिए एक जोखिम कारक के रूप मा पीपीए के संभावित भूमिका वर्तमान मा जांच के तहत है, आत्मकेंद्रित वाले व्यक्तियन पर एकर प्रभाव तंत्रिका भेदभाव पैदा करै से आगे बढ़ सकत है।
जठरांत्र संबंधी लक्षण जइसे कि दस्त अऊर कब्ज न्यूरोडेवलपमेंटल विकार वाले मरीजन मा आम हैं (काओ एट अल।, 2021)। पिछले अध्ययनन से पता चला है कि आत्मकेंद्रित स्पेक्ट्रम विकार (एएसडी) वाले मरीजन के माइक्रोबायोम स्वस्थ व्यक्तियन से अलग होत है, जेसे आंत माइक्रोबायोटा डिसबायोसिस (फाइनगोल्ड एट अल., 2010) के उपस्थिति का पता चलत है। इसी तरह, भड़काऊ आंत्र रोग, मोटापा, अल्जाइमर रोग आदि वाले मरीजन के माइक्रोबायोम विशेषता भी स्वस्थ व्यक्तियन से अलग होत हैं (टर्नबौग एट अल., 2009; वोग्ट एट अल., 2017; हेनके एट अल., 2019)। हालांकि, आज तक, आंत माइक्रोबायोम अऊर न्यूरोलॉजिकल रोगन या लक्षणन के बीच कौनो कारण संबंध स्थापित नाहीं कीन गा है (याप एट अल., 2021), हालांकि कई जीवाणु प्रजातियन के बारे मा सोचा जात है कि इनमा से कुछ रोग अवस्था मा भूमिका निभात हैं। उदाहरण के लिए, ऑटिज्म के मरीजन के माइक्रोबायोटा मा अक्करमैंसिया, बैक्टीरॉइड्स, क्लोस्ट्रिडियम, लैक्टोबैसिलस, डेसल्फोविब्रिओ अऊर अन्य जेनेरा अधिक प्रचुर मात्रा मा पाए जात हैं (टोमोवा एट अल., 2015; गोलुबेवा एट अल., 2017; क्रिस्टियानो एट अल., 2018; ज़ुरिटा एट अल., 2020)। विशेष रूप से, इनमा से कुछ प्रजाति के सदस्य प्रजाति के पास पीपीए उत्पादन से जुड़े जीन होए के लिए जाना जात है (रीचर्ड एट अल।, 2014; यूं अऊर ली, 2016; झांग एट अल।, 2019; बाउर अऊर ड्यूरे, 2023)। पीपीए के रोगाणुरोधी गुणन का देखत हुए, पीपीए-उत्पादक बैक्टीरिया के विकास के लिए एकर बहुतायत बढ़ावै से फायदेमंद हो सकत है (जैकबसन एट अल., 2018)। यहिसे, एक पीएफए-समृद्ध वातावरण आंत माइक्रोबायोटा मा बदलाव का जन्म दे सकत है, जेहिमा जठरांत्र संबंधी रोगजनक शामिल हैं, जवन जठरांत्र संबंधी लक्षणन का जन्म देय वाले संभावित कारक होइ सकत हैं।
माइक्रोबायोम अनुसंधान मा एक केंद्रीय प्रश्न ई है कि का माइक्रोबियल संरचना मा अंतर अंतर्निहित रोगन का कारण या लक्षण है। आहार, आंत माइक्रोबायोम अऊर न्यूरोलॉजिकल रोगन के बीच जटिल संबंध का स्पष्ट करै के दिशा मा पहिला कदम माइक्रोबियल संरचना पर आहार के प्रभावन का आकलन करब है। यहि अंत तक, हम पीपीए-समृद्ध या पीपीए-कम आहार खिलाए गए चूहों के संतान के आंत माइक्रोबायोम के तुलना करै के लिए लंबे समय तक पढ़े गए मेटाजेनोमिक अनुक्रमण का उपयोग किहिन। संतानन का ओनके महतारी के जइसन आहार खिलावा जात रहा। हम परिकल्पना किहिन कि पीपीए-समृद्ध आहार के परिणामस्वरूप आंत माइक्रोबियल संरचना अऊर माइक्रोबियल कार्यात्मक मार्गन मा बदलाव होइ, खासकर पीपीए चयापचय अऊर/या पीपीए उत्पादन से संबंधित।
ई अध्ययन मा एफवीबी/एन-टीजी(जीएफएपी-जीएफपी)14मेस/जे ट्रांसजेनिक चूहों (जैक्सन प्रयोगशालाओं) का उपयोग कीन गा रहा जवन सेंट्रल फ्लोरिडा विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल अऊर उपयोग समिति (यूसीआईए-सीयू) के दिशानिर्देशन के पालन करत ग्लिया-विशिष्ट जीएफएपी प्रमोटर के नियंत्रण मा ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) का ओवरएक्सप्रेस करत हैं (यूसीआईए-सीयू परमिट संख्या: प्रोटो202000002)। दूध छुड़ावै के बाद, चूहों का पिंजरा मा अलग-अलग रखा गा रहा, जेहिमा हर लिंग के 1-5 चूहा प्रति पिंजरा रहे। चूहों का या तौ एक शुद्ध नियंत्रण आहार (संशोधित ओपन-लेबल मानक आहार, 16 किलो कैलोरी% वसा) या एक सोडियम प्रोपियोनेट-पूरक आहार (संशोधित ओपन-लेबल मानक आहार, 16 किलो कैलोरी% वसा, 5,000 पीपीएम सोडियम प्रोपियोनेट युक्त) के साथ एड लिबिटम खिलावा गा रहा। उपयोग कीन गा सोडियम प्रोपियोनेट के मात्रा 5,000 मिलीग्राम पीएफए/किलोग्राम कुल खाद्य वजन के बराबर रही। ई खाद्य संरक्षक के रूप मा उपयोग के लिए अनुमोदित पीपीए के सबसे अधिक सांद्रता है। यहि अध्ययन के तैयारी करै के ताईं, माता-पिता चूहों का संभोग से पहिले 4 हफ्ता तक दुइनौ आहार खिलावा गा रहा अऊर बांध के गर्भावस्था के दौरान जारी रहा। संतान चूहों [22 चूहे, 9 नियंत्रण (6 नर, 3 मादा) अऊर 13 पीपीए (4 नर, 9 मादा)] का दूध छुड़ावा गा रहा अऊर फिर 5 महीना तक बांध के समान आहार पर जारी रखा गा रहा। संतान चूहों का 5 महीना के उम्र मा बलिदान कीन गा रहा अऊर ओनके आंत के मल सामग्री एकत्र कीन गा रहा अऊर शुरू मा -20°C पर 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब मा संग्रहीत कीन गा रहा अऊर फिर -80°C फ्रीजर मा तब तक स्थानांतरित कीन गा रहा जब तक कि मेजबान डीएनए खतम न होइ गवा अऊर माइक्रोबियल न्यूक्लिक एसिड निकाला नाहीं गा।
मेजबान डीएनए का एक संशोधित प्रोटोकॉल (चरलाम्पस एट अल., 2019) के अनुसार हटावा गा रहा। संक्षेप मा, मल सामग्री का 500 μl InhibitEX (Qiagen, Cat#/ID: 19593) मा स्थानांतरित कीन गा रहा अऊर जमे हुए संग्रहीत कीन गा रहा। प्रति निष्कर्षण अधिकतम 1-2 मल गोलियन का संसाधित करा। तब मल सामग्री का एक घोल बनावै के लिए ट्यूब के अंदर एक प्लास्टिक के मूसल का उपयोग कइके यांत्रिक रूप से समरूप बनावा गा रहा। नमूना का 10,000 आरसीएफ पर 5 मिनट या जब तक नमूना गोली न बन जाय तब तक सेंट्रीफ्यूज करा, फिर सुपरनेटेंट का आकांक्षा करा अऊर गोली का 250 μl 1× PBS मा फिर से निलंबित करा। यूकेरियोटिक कोशिका झिल्ली का ढीला करै के लिए डिटर्जेंट के रूप मा नमूना मा 250 μl 4.4% सैपोनिन घोल (टीसीआई, उत्पाद संख्या एस0019) जोड़ौ। नमूना चिकना होए तक धीरे से मिलावा गा अऊर 10 मिनट के लिए कमरा के तापमान पर ऊष्मायन करा गा। अगला, यूकेरियोटिक कोशिका का बाधित करै के लिए, नमूना मा 350 μl न्यूक्लियस-मुक्त पानी डाला गा रहा, 30 सेकंड के लिए ऊष्मायन करा गा रहा, अऊर फिर 12 μl 5 M NaCl डाला गा रहा। फिर नमूना 5 मिनट के लिए 6000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहें। सुपरनेटेंट का आकांक्षा करा अऊर गोली का 100 μl 1X PBS मा फिर से निलंबित करा। मेजबान डीएनए का हटावै के ताईं, 100 μl HL-SAN बफर (12.8568 g NaCl, 4 ml 1M MgCl2, 36 ml न्यूक्लियस-मुक्त पानी) अऊर 10 μl HL-SAN एंजाइम (आर्टिकजाइम्स P/N 70910-202) जोड़ौ। नमूना पिपेटिंग द्वारा पूरी तरह से मिलावा गा रहा अऊर एक एपेंडॉर्फ TM थर्मोमिक्सर सी पर 800 आरपीएम पर 30 मिनट के लिए 37 °C पर ऊष्मायन करा गा रहा। ऊष्मायन के बाद, 3 मिनट के लिए 6000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज करा गा रहा अऊर 800 μl अऊर 1000 μl PX1 PBS के साथ दुई बार धोवा गा रहा। अंत मा, 100 μl 1X PBS मा गोली का फिर से निलंबित करा।
कुल जीवाणु डीएनए का न्यू इंग्लैंड बायोलैब्स मोनार्क जीनोमिक डीएनए शुद्धिकरण किट (न्यू इंग्लैंड बायोलैब्स, इप्सविच, एमए, कैट # टी3010एल) का उपयोग कइके अलग कीन गा रहा। किट के साथ प्रदान कीन गा मानक संचालन प्रक्रिया मा थोड़ा संशोधन कीन गा है। अंतिम इल्यूशन के लिए संचालन से पहिले 60°C पर न्यूक्लियस-मुक्त पानी का ऊष्मायन अऊर रखरखाव करा। हर नमूना मा 10 μl प्रोटीनेज के अऊर 3 μl आरएनएज ए जोड़ौ। फिर 100 μl सेल लाइसिस बफर डालौ अऊर धीरे से मिलावा। तब नमूना का कम से कम 1 घंटा अऊर 3 घंटा तक 56°C अऊर 1400 rpm पर एक EppendorfTM थर्मोमिक्सर C मा ऊष्मायन करा गा रहा। ऊष्मायन नमूना 3 मिनट के लिए 12,000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहें अऊर हर नमूना से सुपरनेटेंट का एक अलग 1.5 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब मा स्थानांतरित कीन गा रहा जेहिमा 400 μL बाइंडिंग घोल रहा। फिर ट्यूबन का 1 सेकंड के अंतराल पर 5-10 सेकंड के लिए पल्स भंवर बनावा गा रहा। हर नमूना (लगभग 600-700 μL) के पूरा तरल सामग्री का एक फ्लो-थ्रू कलेक्शन ट्यूब मा रखे गए फिल्टर कारतूस मा स्थानांतरित करा। ट्यूबन का 1,000 आरसीएफ पर 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहा ताकि प्रारंभिक डीएनए बाइंडिंग के अनुमति मिल सके अऊर फिर अवशिष्ट तरल का हटावै के लिए 1 मिनट के लिए 12,000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहा। नमूना स्तंभ का एक नये संग्रह ट्यूब मा स्थानांतरित कीन गा रहा अऊर फिर दुइ बार धोवा गा रहा। पहिला धोवै के लिए, हर ट्यूब मा 500 μL धोवै बफर डालौ। ट्यूब का 3-5 बार पलटौ अऊर फिर 1 मिनट के लिए 12,000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज करौ। संग्रह ट्यूब से तरल पदार्थ का फेंकौ अऊर फिल्टर कारतूस का वापस उहै संग्रह ट्यूब मा रखौ। दूसर धोवै के लिए, बिना उल्टा किहे फिल्टर मा 500 μL धोवै बफर डालौ। नमूना 1 मिनट के लिए 12,000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहें। फिल्टर का 1.5 एमएल लोबाइंड® ट्यूब मा स्थानांतरित करा अऊर 100 μL पहिले से गर्म न्यूक्लियस-मुक्त पानी डाला। फिल्टरन का 1 मिनट के लिए कमरा के तापमान पर ऊष्मायन करा गा रहा अऊर फिर 1 मिनट के लिए 12,000 आरसीएफ पर सेंट्रीफ्यूज कीन गा रहा। एल्यूटेड डीएनए का -80°C पर संग्रहीत कीन गा रहा।
डीएनए सांद्रता का माप एक क्यूबिट TM 4.0 फ्लोरोमीटर का उपयोग कइके कीन गा रहा। निर्माता के निर्देशन के अनुसार क्यूबिट TM 1X dsDNA हाई सेंसिटिविटी किट (Cat. No. Q33231) का उपयोग कइके डीएनए तैयार कीन गा रहा। डीएनए टुकड़ा लंबाई वितरण का माप एक एजिलेंट TM 4150 या 4200 टेपस्टेशन का उपयोग कइके कीन गा रहा। डीएनए एजिलेंट TM जीनोमिक डीएनए रिएजेंट्स (कैट. नंबर 5067-5366) अऊर जीनोमिक डीएनए स्क्रीनटेप (कैट. नंबर 5067-5365) का उपयोग कइके तैयार कीन गा रहा। निर्माता के निर्देशन के अनुसार ऑक्सफोर्ड नैनोपोर टेक्नोलॉजीज TM (ओएनटी) रैपिड पीसीआर बारकोडिंग किट (एसक्यूके-आरपीबी004) का उपयोग कइके लाइब्रेरी तैयारी कीन गै रही। डीएनए का एक Min106D फ्लो सेल (R 9.4.1) के साथ एक ONT GridIONTM Mk1 सीक्वेंसर का उपयोग कइके अनुक्रमित कीन गा रहा। अनुक्रमण सेटिंग्स रहीं: उच्च सटीकता आधार कॉलिंग, 9 का न्यूनतम q मान, बारकोड सेटअप अऊर बारकोड ट्रिम। नमूना 72 घंटा के लिए अनुक्रमित कीन गा रहें, जेहिके बाद आगे के प्रसंस्करण अऊर विश्लेषण के लिए आधार कॉल डेटा जमा कीन गा रहें।
जैव सूचना विज्ञान प्रसंस्करण पहिले से वर्णित विधियन (ग्रीनमैन एट अल., 2024) का उपयोग कइके कीन गा रहा। अनुक्रमण से प्राप्त FASTQ फाइलन का हर नमूना के लिए निर्देशिका मा विभाजित कीन गा रहा। जैव सूचना विज्ञान विश्लेषण से पहिले, डेटा का निम्नलिखित पाइपलाइन का उपयोग कइके संसाधित कीन गा रहा: सबसे पहिले, नमूना के FASTQ फाइलन का एक एकल FASTQ फाइल मा विलय कीन गा रहा। फिर, 1000 बीपी से कम रीड्स का फिल्टलॉन्ग बनाम 0.2.1 का उपयोग कइके फ़िल्टर कीन गा रहा, जेहिमा एकमात्र पैरामीटर बदला गा रहा –मिनट_लेंथ 1000 (विक, 2024)। आगे के फ़िल्टरिंग से पहिले, निम्नलिखित पैरामीटर के साथ नैनोप्लॉट v. 1.41.3 का उपयोग कइके पढ़े के गुणवत्ता का नियंत्रित कीन गा रहा: –fastq –plots dot –N50 -o(डी कोस्टर अऊर रेडमेकर्स, 2023)। रीड्स का निम्नलिखित पैरामीटरन के साथ मेजबान-दूषित रीड्स का हटावै के लिए minimap2 v. 2.24-r1122 का उपयोग कइके माउस संदर्भ जीनोम GRCm39 (GCF_000001635.27) से संरेखित कीन गा रहा: -L -ax map-ont(ली, 2018)। उत्पन्न संरेखण फाइलन का samtools v. 1.16.1 मा samtools view -b (Danecek et al., 2021) का उपयोग कइके BAM प्रारूप मा बदला गा रहा। तब samtools view -b -f 4 का उपयोग कइके असंरेखित रीड्स के पहचान कीन गै, जेसे पता चलत है कि ई रीड्स मेजबान जीनोम से संबंधित नाहीं रहे। असंरेखित रीड्स का डिफ़ॉल्ट पैरामीटर के साथ samtools bam2fq का उपयोग कइके FASTQ प्रारूप मा वापस बदला गा रहा। नैनोप्लॉट का पहिले वर्णित सेटिंग्स का उपयोग कइके आगे फ़िल्टर कीन गा रीड पर फिर से चलावा गा रहा। फ़िल्टरिंग के बाद, मेटाजेनोमिक डेटा का निम्नलिखित पैरामीटर के साथ मेटाफ्लाई v. 2.8.2-b1689 का उपयोग कइके इकट्ठा कीन गा रहा: -नैनो-रॉ–मेटा (कोलमोगोरोव एट अल., 2020)। शेष पैरामीटरन का उनके डिफ़ॉल्ट मानन पर छोड़ौ। असेंबली के बाद, फ़िल्टर कीन गा रीड का minimap2 का उपयोग कइके असेंबली मा मैप कीन गा रहा, अऊर -ax map-ont पैरामीटर का उपयोग SAM प्रारूप मा एक संरेखण फ़ाइल बनावै के लिए कीन गा रहा। असेंबली का सबसे पहिले निम्नलिखित पैरामीटर के साथ racon v. 1.4.20 का उपयोग कइके परिष्कृत कीन गा रहा: -m 8 -x -6 -g -8 -w 500 -u ( Vaser et al., 2017 ). रैकन पूरा होए के बाद, ई medaka_consesus का उपयोग करत हुए, medaka v. 1.7.2 के साथ अउर परिष्कृत कीन गा रहा, जेहिमा -m पैरामीटर के अलावा सब पैरामीटर उनके डिफ़ॉल्ट मानन पर छोड़ दीन गा रहा। -m पैरामीटर का r941_min_hac_g507 पर सेट कीन गा है ताकि हमरे डेटा (नैनोपोरेटेक/मेडाका, 2024) के लिए उपयोग कीन जाय वाली प्रवाह सेल रसायन विज्ञान अऊर उच्च-सटीकता आधार कॉलिंग का निर्दिष्ट कीन जा सके। बाद के विश्लेषण के लिए फ़िल्टर कीन गा डेटा (जेका आगे माइक्रोबियल डेटा कहा जाई) अऊर अंतिम साफ कीन गा असेंबली का उपयोग कीन गा रहा।
वर्गीकरण के लिए, रीड्स अऊर इकट्ठा कीन गा कॉन्टिग्स का Kraken2 v. 2.1.2 ( Wood et al., 2019 ) का उपयोग कइके वर्गीकृत कीन गा रहा। क्रमशः रीड अऊर असेंबली के लिए रिपोर्ट अऊर आउटपुट फाइल बनावा। रीड अऊर असेंबली का विश्लेषण करै के लिए –use-names विकल्प का उपयोग करा। –gzip-संकुचित अऊर –युग्मित विकल्प पढ़े गए खंडन के लिए निर्दिष्ट कीन जात हैं। मेटाजेनोम मा कर के सापेक्ष बहुतायत का अनुमान ब्रैकन बनाम 2.8 (लू एट अल., 2017) का उपयोग कइके लगावा गा रहा। हम सबसे पहिले निम्नलिखित पैरामीटरन के साथ ब्रैकन-बिल्ड का उपयोग कइके 1000 आधारन से युक्त एक kmer डेटाबेस बनाइन: -d-k 35 -l 1000 एक बार बन जाय के बाद, ब्रैकन kraken2 द्वारा उत्पन्न रिपोर्ट के आधार पर चलत है अऊर निम्नलिखित विकल्पन का उपयोग कइके डेटा का फ़िल्टर करत है: -d -I -O-पी 1000 -एल

ओनमा से, विश्लेषण कीन जात वर्गीकरण स्तर के आधार पर पी, जी या एस का चयन कीन जात है। झूठे सकारात्मक वर्गीकरण के प्रभाव का कम से कम करै के लिए, 1e-4 (1/10,000 रीड) के न्यूनतम सापेक्ष बहुतायत सीमा अपनावा गा रहा। सांख्यिकीय विश्लेषण से पहिले, ब्रैकन (अंश_कुल_रीड्स) द्वारा रिपोर्ट कीन गा सापेक्ष बहुतायत का केंद्रित लॉग-अनुपात (सीएलआर) परिवर्तन (एचिसन, 1982) का उपयोग कइके बदला गा रहा। डेटा परिवर्तन के लिए सीएलआर विधि चुना गा रहा काहे से कि ई पैमाना-अपरिवर्तनीय अऊर गैर-विरल डेटासेट (ग्लोर एट अल., 2017) के लिए पर्याप्त है। सीएलआर परिवर्तन प्राकृतिक लघुगणक का उपयोग करत है। ब्रैकन द्वारा रिपोर्ट कीन गा गिनती डेटा का सापेक्ष लॉग अभिव्यक्ति (आरएलई) (एंडर्स अऊर ह्यूबर, 2010) का उपयोग कइके सामान्यीकृत कीन गा रहा। आंकड़ा matplotlib v. 3.7.1, seaborn v. 3.7.2 अऊर अनुक्रमिक लघुगणक (ग्लोर एट अल., 2017) के संयोजन का उपयोग कइके उत्पन्न कीन गा रहें। 0.12.2 अऊर स्टैंटनोटेशन बनाम 0.5.0 (हंटर, 2007; वास्कोम, 2021; चारलियर एट अल., 2022)। सामान्यीकृत जीवाणु गिनती का उपयोग कइके प्रत्येक नमूना के लिए बैसिलस/बैक्टीरोइडेट्स अनुपात के गणना कीन गै रही। तालिकाओं मा बतावा गा मान 4 दशमलव स्थान तक गोल कीन जात हैं। सिम्पसन विविधता सूचकांक के गणना क्राकेनटूल्स बनाम 1.2 पैकेज (लू एट अल., 2022) मा प्रदान कीन गा alpha_diversity.py स्क्रिप्ट का उपयोग कइके कीन गा रहा। ब्रैकन रिपोर्ट स्क्रिप्ट मा प्रदान कीन गा है अऊर सिम्पसन इंडेक्स "Si" -an पैरामीटर के लिए प्रदान कीन गा है। बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का औसत सीएलआर अंतर ≥ 1 या ≤ -1 के रूप मा परिभाषित कीन गा रहा। ±1 का औसत सीएलआर अंतर एक नमूना प्रकार के बहुतायत मा 2.7 गुना वृद्धि का इंगित करत है। चिन्ह (+/-) बतावत है कि का टैक्सन क्रमशः पीपीए नमूना अऊर नियंत्रण नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा है। मान-व्हिटनी यू टेस्ट (विर्टनेन एट अल., 2020) का उपयोग कइके महत्व निर्धारित कीन गा रहा। स्टैट्समॉडल्स बनाम 0.14 (बेंजामिनी अऊर होचबर्ग, 1995; सीबोल्ड अऊर पर्कटोल्ड, 2010) का उपयोग कीन गा रहा, अऊर बेंजामिनी-होचबर्ग प्रक्रिया का कई परीक्षणन के सही करै के लिए लागू कीन गा रहा। सांख्यिकीय महत्व का निर्धारित करै के लिए सीमा के रूप मा एक समायोजित पी-मान ≤ 0.05 का उपयोग कीन गा रहा।
जीन एनोटेशन अऊर सापेक्ष बहुतायत अनुमान मारंगा एट अल द्वारा वर्णित प्रोटोकॉल के संशोधित संस्करण का उपयोग कइके कीन गा रहा। (मरंगा एट अल., 2023)। सबसे पहिले, 500 बीपी से कम कॉन्टिग्स का SeqKit v. 2.5.1 (Shen et al., 2016) का उपयोग कइके सब असेंबली से हटावा गा रहा। तब चयनित असेंबली का एक पैन-मेटाजेनोम मा जोड़ा गा रहा। ओपन रीडिंग फ्रेम (ओआरएफ) का निम्नलिखित पैरामीटर के साथ प्रोडिगल बनाम 1.0.1 (प्रोडिगल बनाम 2.6.3 का एक समानांतर संस्करण) का उपयोग कइके पहचाना गा रहा: -डी-एफ जीएफएफ-आई -O-टी 24 -पी मेटा -सी 10000 (हाइट एट अल., 2012; जेनिके, 2024)। तब परिणामी न्यूक्लियोटाइड फाइलन का पायथन का उपयोग कइके सब अधूरा जीन का हटावै के लिए फ़िल्टर कीन गा रहा। तब सीडी-हिट v. 4.8.1 का उपयोग निम्नलिखित पैरामीटर के साथ जीन का क्लस्टर करै के लिए कीन गा रहा: सीडी-हिट-एस्ट -आई -O-सी 0.95 -एस 0.85 -एएस 0.9 -एन 10 -डी 256 -एम 350000 -टी 24 -एल 100 -जी 1 (फू एट अल., 2012)। जीन बहुतायत अऊर एनोटेशन का अनुमान लगावै के लिए उत्पन्न गैर-अनावश्यक जीन कैटलॉग का उपयोग कीन गा रहा। सापेक्ष जीन बहुतायत का अनुमान केएमए बनाम 1.4.9 (क्लाउसेन एट अल., 2018) का उपयोग कइके लगावा गा रहा। सबसे पहिले, निम्नलिखित पैरामीटर के साथ केएमए इंडेक्स का उपयोग कइके एक इंडेक्स फ़ाइल बनावा: -i -Oफिर, जैव सूचना विज्ञान पाइपलाइन अनुभाग मा वर्णित प्रत्येक नमूना के लिए माइक्रोबियल रीड के साथ उत्पन्न सूचकांक का उपयोग करत हुए, केएमए का निम्नलिखित पैरामीटर के साथ चलावा गा रहा: -i -O-टी_डीबी-bcNano -bc 0.7 -ef -t 24. फिर, जीन गिनती का सीएलआर का उपयोग कइके सामान्यीकृत कीन गा रहा, अऊर विज्ञान-किट लर्न के प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) वर्ग का उपयोग कीन गा रहा (पेड्रेगोसा एट अल।, 2011)। अनुमानित जीन एनोटेशन eggNOG v. 2.1.12 के emapper.py स्क्रिप्ट अऊर eggNOG डेटाबेस संस्करण 5.0.2 का निम्नलिखित पैरामीटर के साथ उपयोग कइके गैर-अनावश्यक जीन कैटलॉग पर कीन गा रहा: –itype CDS –cpu 24 -i– डाटा कैटलॉग–go_evidence गैर-इलेक्ट्रॉनिक – आउटपुट– आउटपुट डायरेक्टरी–लक्ष्य_ऑर्थोलॉग सब –बीज_ऑर्थोलॉग_मूल्यांकन 0.001 –बीज_ऑर्थोलॉग_स्कोर 60 –क्वेरी_कवर 20 –विषय_कवर 0 –अनुवाद –ओवरराइड –टेम्प_डायर(कैंटलापिएड्रा एट अल., 2021)। केएमए परिणामन का पर्याप्त टेम्पलेट कवरेज अऊर टेम्पलेट पहचान (≥ 90%) अऊर बहुतायत (गहराई ≥ 3) वाले जीन का चयन करै के लिए जांच कीन गा रहा। ऊपर वर्णित के अनुसार केएमए गहराई परिणामन का सीएलआर का उपयोग कइके बदला गा रहा। तब केएमए परिणामन के तुलना प्रत्येक जीन के लिए कॉन्टिग स्रोत का उपयोग कइके कार्यात्मक एनोटेशन अऊर वर्गीकरण परिणामन से कॉन्टिग आईडी के साथ कीन गै। कर के साथ, जीन बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का औसत सीएलआर अंतर ≥ 1 या ≤ -1 वाले जीन के रूप मा परिभाषित कीन गा रहा, एक चिन्ह (+/-) के साथे जवन इंगित करत है कि जीन क्रमशः पीपीए या नियंत्रण नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहा।
जीन का सबसे पहिले क्योटो एनसाइक्लोपीडिया ऑफ जीन्स एंड जीनोम्स (केईजीजी) ऑर्थोलॉग (केओ) पहचानकर्ताओं के अनुसार समूहीकृत कीन गा रहा, जेका जीन मार्ग बहुतायत के तुलना करै के लिए एग्नोजी द्वारा सौंपा गा रहा। नॉकआउट के बिना जीन या कई नॉकआउट वाले जीन का विश्लेषण से पहिले हटा दीन गा रहा। तब प्रति नमूना प्रत्येक केओ के औसत बहुतायत के गणना कीन गै अऊर सांख्यिकीय विश्लेषण कीन गा। पीपीए चयापचय जीन का कौनो भी जीन के रूप मा परिभाषित कीन गा रहा जेका KEGG_Pathway कॉलम मा एक पंक्ति ko00640 सौंपा गा रहा, जवन KEGG के अनुसार प्रोपियोनेट चयापचय मा एक भूमिका का इंगित करत है। पीपीए उत्पादन से जुड़े के रूप मा पहचाने गए जीन पूरक तालिका 1 (रीचर्ड एट अल।, 2014; यांग एट अल।, 2017) मा सूचीबद्ध हैं। पीपीए चयापचय अऊर उत्पादन जीन के पहचान करै के लिए क्रमचय परीक्षण कीन गा रहा जवन हर नमूना प्रकार मा काफी अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। विश्लेषण कीन गा हर जीन के लिए एक हजार क्रमचय कीन गा रहा। सांख्यिकीय महत्व का निर्धारित करै के लिए 0.05 का पी-मान कटऑफ के रूप मा उपयोग कीन गा रहा। क्लस्टर के भीतर प्रतिनिधि जीन के एनोटेशन के आधार पर एक क्लस्टर के भीतर व्यक्तिगत जीन का कार्यात्मक एनोटेशन सौंपा गा रहा। पीपीए चयापचय अऊर/या पीपीए उत्पादन से जुड़े करन का eggNOG का उपयोग कइके कार्यात्मक एनोटेशन के दौरान बनाए रखे गए समान कॉन्टिग आईडी के साथ Kraken2 आउटपुट फाइलन मा कॉन्टिग आईडी का मिलान कइके पहचाना जा सकत है। महत्व परीक्षण पहिले वर्णित मान-व्हिटनी यू परीक्षण का उपयोग कइके कीन गा रहा। बेंजामिनी-होचबर्ग प्रक्रिया का उपयोग कइके कई परीक्षणन के लिए सुधार कीन गा रहा। सांख्यिकीय महत्व का निर्धारित करै के लिए कटऑफ के रूप मा ≤ 0.05 का पी-मान उपयोग कीन गा रहा।
चूहों के आंत माइक्रोबायोम के विविधता का आकलन सिम्पसन विविधता सूचकांक का उपयोग कइके कीन गा रहा। जीनस अऊर प्रजाति विविधता के संदर्भ मा नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना के बीच कौनो महत्वपूर्ण अंतर नाहीं देखा गा रहा (जीनस के लिए पी-मान: 0.18, प्रजाति के लिए पी-मान: 0.16) (चित्र 1)। फिर प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) का उपयोग कइके माइक्रोबियल संरचना के तुलना कीन गै। चित्र 2 नमूना के उनके फ़ाइला द्वारा क्लस्टरिंग देखावत है, जेसे पता चलत है कि पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना के बीच माइक्रोबायोम के प्रजाति संरचना मा अंतर रहा। ई क्लस्टरिंग जीनस स्तर पर कम स्पष्ट रहा, जेसे पता चलत है कि पीपीए कुछ बैक्टीरिया का प्रभावित करत है (पूरक चित्र 1)।
चित्र 1. माउस आंत माइक्रोबायोम के जेनेरा अऊर प्रजाति संरचना के अल्फा विविधता। पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना मा जेनेरा (ए) अऊर प्रजाति (बी) के सिम्पसन विविधता सूचकांक देखावै वाले बॉक्स प्लॉट। मान-व्हिटनी यू टेस्ट का उपयोग कइके महत्व निर्धारित कीन गा रहा, अऊर बेंजामिनी-होचबर्ग प्रक्रिया का उपयोग कइके कईयो सुधार कीन गा रहा। एनएस, पी-मान महत्वपूर्ण नाहीं रहा (पी> 0.05)।
चित्र 2. प्रजाति के स्तर पर माउस आंत माइक्रोबायोम संरचना के प्रमुख घटक विश्लेषण के परिणाम। प्रमुख घटक विश्लेषण भूखंड उनके पहिले दुई प्रमुख घटकन मा नमूना के वितरण का प्रदर्शित करत है। रंग नमूना प्रकार का इंगित करत हैं: पीपीए-उजागर चूहा बैंगनी अऊर नियंत्रण चूहा पीला होत हैं। प्रमुख घटक 1 अऊर 2 क्रमशः x-अक्ष अऊर y-अक्ष पर प्लॉट कीन जात हैं, अऊर ओनके समझाए गए भिन्नता अनुपात के रूप मा व्यक्त कीन जात हैं।
आरएलई रूपांतरित गिनती डेटा का उपयोग करत हुए, नियंत्रण अऊर पीपीए चूहों (नियंत्रण: 9.66, पीपीए: 3.02; पी-मान = 0.0011) मा औसत बैक्टीरोइडेट्स/बैसिली अनुपात मा एक महत्वपूर्ण कमी देखी गै। ई अंतर नियंत्रण के तुलना मा पीपीए चूहों मा बैक्टीरोइडेट्स के उच्च बहुतायत के कारण रहा, हालांकि अंतर महत्वपूर्ण नाहीं रहा (नियंत्रण औसत सीएलआर: 5.51, पीपीए औसत सीएलआर: 6.62; पी-मान = 0.054), जबकि बैक्टीरोइडेट्स बहुतायत समान रही (नियंत्रण औसत सीएलआर: 7.76, पीपीए-मूल्य: पीपीए-मान: 0.066। = 0.18)।
आंत माइक्रोबायोम के वर्गीकरण सदस्यन के बहुतायत के विश्लेषण से पता चला कि 1 फ़ाइलम अऊर 77 प्रजाति पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना (पूरक तालिका 2) के बीच काफी भिन्न रहीं। पीपीए नमूना मा 59 प्रजाति के बहुतायत नियंत्रण नमूना के तुलना मा काफी अधिक रही, जबकि नियंत्रण नमूना मा केवल 16 प्रजाति के बहुतायत पीपीए नमूना के तुलना मा अधिक रही (चित्र 3)।
चित्र 3. पीपीए अऊर नियंत्रण चूहों के आंत माइक्रोबायोम मा टैक्सा के विभेदक बहुतायत। ज्वालामुखी भूखंड पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना के बीच जेनेरा (ए) या प्रजाति (बी) के बहुतायत मा अंतर प्रदर्शित करत हैं। धूसर बिंदु कर बहुतायत मा कौनो महत्वपूर्ण अंतर नाहीं बतावत हैं। रंगीन बिंदु बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का इंगित करत हैं (पी-मान ≤ 0.05)। नमूना प्रकारन के बीच बहुतायत मा सबसे बड़ा अंतर वाले शीर्ष 20 कर क्रमशः लाल अऊर हल्का नीला (नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना) मा देखावा गा है। नियंत्रण या पीपीए नमूना मा नियंत्रण के तुलना मा पीला अऊर बैंगनी बिंदु कम से कम 2.7 गुना अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। काला बिंदु काफी अलग बहुतायत वाले कर का प्रतिनिधित्व करत हैं, जेहिमा -1 अऊर 1 के बीच औसत सीएलआर अंतर होत है। पी मानन के गणना मान-व्हिटनी यू परीक्षण का उपयोग कइके कीन गा रहा अऊर बेंजामिन-होचबर्ग प्रक्रिया का उपयोग कइके कई परीक्षणन के लिए सही कीन गा रहा। बोल्ड मीन सीएलआर अंतर बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का इंगित करत हैं।
आंत माइक्रोबियल संरचना का विश्लेषण करै के बाद, हम माइक्रोबायोम का एक कार्यात्मक एनोटेशन किहिन। निम्न गुणवत्ता वाले जीन का छाने के बाद, सब नमूना मा कुल 378,355 अद्वितीय जीन के पहचान कीन गै। इन जीन के परिवर्तित बहुतायत का उपयोग प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) के लिए कीन गा रहा, अऊर परिणामन से उनके कार्यात्मक प्रोफाइल (चित्र 4) के आधार पर नमूना प्रकारन के उच्च डिग्री के क्लस्टरिंग देखा गा रहा।
चित्र 4. माउस आंत माइक्रोबायोम के कार्यात्मक प्रोफाइल का उपयोग करत हुए पीसीए परिणाम। पीसीए प्लॉट उनके पहिले दुई प्रमुख घटकन मा नमूना के वितरण का प्रदर्शित करत है। रंग नमूना प्रकार का इंगित करत हैं: पीपीए-उजागर चूहा बैंगनी अऊर नियंत्रण चूहा पीला होत हैं। प्रमुख घटक 1 अऊर 2 क्रमशः x-अक्ष अऊर y-अक्ष पर प्लॉट कीन जात हैं, अऊर ओनके समझाए गए भिन्नता अनुपात के रूप मा व्यक्त कीन जात हैं।
हम आगे अलग-अलग नमूना प्रकारन मा केईजीजी नॉकआउट के बहुतायत के जांच किहिन। कुल 3648 अद्वितीय नॉकआउट के पहचान कीन गै रही, जेहिमा से 196 नियंत्रण नमूना मा काफी अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे अऊर 106 पीपीए नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे (चित्र 5)। नियंत्रण नमूना मा कुल 145 जीन अऊर पीपीए नमूना मा 61 जीन पावा गा रहा, जेहिमा काफी अलग बहुतायत रही। लिपिड अऊर अमीनोशुगर चयापचय से संबंधित मार्ग पीपीए नमूना (पूरक तालिका 3) मा काफी अधिक समृद्ध रहे। नाइट्रोजन चयापचय अऊर सल्फर रिले सिस्टम से संबंधित मार्ग नियंत्रण नमूना (पूरक तालिका 3) मा काफी अधिक समृद्ध रहे। एमिनोशुगर/न्यूक्लियोटाइड चयापचय (ko:K21279) अऊर इनोसिटोल फॉस्फेट चयापचय (ko:K07291) से संबंधित जीन के बहुतायत पीपीए नमूना (चित्र 5) मा काफी अधिक रही। नियंत्रण नमूना मा बेंजोएट चयापचय (ko:K22270), नाइट्रोजन चयापचय (ko:K00368), अऊर ग्लाइकोलाइसिस/ग्लूकोनोजेनेसिस (ko:K00131) से संबंधित काफी अधिक जीन रहे (चित्र 5)।
चित्र 5. पीपीए अऊर नियंत्रण चूहों के आंत माइक्रोबायोम मा केओ के विभेदक बहुतायत। ज्वालामुखी भूखंड कार्यात्मक समूहन (केओ) के बहुतायत मा अंतर का दर्शावत है। ग्रे डॉट्स केओ का इंगित करत हैं जेकर बहुतायत नमूना प्रकारन के बीच महत्वपूर्ण रूप से अलग नाहीं रही (पी-मान > 0.05)। रंगीन बिंदु बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का इंगित करत हैं (पी-मान ≤ 0.05)। नमूना प्रकारन के बीच बहुतायत मा सबसे बड़ा अंतर वाले 20 केओ क्रमशः नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना के अनुरूप लाल अऊर हल्का नीला रंग मा देखावा गा है। पीला अऊर बैंगनी बिंदु केओ का इंगित करत हैं जवन क्रमशः नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना मा कम से कम 2.7 गुना अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। काला बिंदु काफी अलग बहुतायत वाले केओ का इंगित करत हैं, जेहिमा -1 अऊर 1 के बीच औसत सीएलआर अंतर होत है। पी मानन के गणना मान-व्हिटनी यू परीक्षण का उपयोग कइके कीन गा रहा अऊर बेंजामिन-होचबर्ग प्रक्रिया का उपयोग कइके कई तुलना के लिए समायोजित कीन गा रहा। NaN इंगित करत है कि केओ केईजीजी मा कौनो मार्ग से संबंधित नाहीं है। बोल्ड मीन सीएलआर अंतर मान बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का इंगित करत हैं। सूचीबद्ध केओ के मार्गन के बारे मा विस्तृत जानकारी के लिए, पूरक तालिका 3 देखौ।
एनोटेट जीन मा, 1601 जीन मा नमूना प्रकारन (पी ≤ 0.05) के बीच काफी अलग बहुतायत रही, जेहिमा हर जीन कम से कम 2.7 गुना अधिक प्रचुर मात्रा मा रहा। इन जीनन मा से, 4 जीन नियंत्रण नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे अऊर 1597 जीन पीपीए नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। काहे से कि पीपीए मा रोगाणुरोधी गुण होत हैं, हम नमूना प्रकारन के बीच पीपीए चयापचय अऊर उत्पादन जीन के बहुतायत के जांच किहिन। 1332 पीपीए चयापचय से संबंधित जीन मा से, 27 जीन नियंत्रण नमूना मा काफी अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे अऊर 12 जीन पीपीए नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। 223 पीपीए उत्पादन से संबंधित जीन मा से, 1 जीन पीपीए नमूना मा काफी अधिक प्रचुर मात्रा मा रहा। चित्र 6 ए आगे पीपीए चयापचय मा शामिल जीन के उच्च बहुतायत का दर्शाता है, जेहिमा नियंत्रण नमूना अऊर बड़े प्रभाव आकार मा काफी अधिक बहुतायत है, जबकि चित्र 6 बी पीपीए नमूना मा देखे गए काफी अधिक बहुतायत वाले व्यक्तिगत जीन का उजागर करत है।
चित्र 6. माउस आंत माइक्रोबायोम मा पीपीए-संबंधित जीन के विभेदक बहुतायत। ज्वालामुखी भूखंड पीपीए चयापचय (ए) अऊर पीपीए उत्पादन (बी) से जुड़े जीन के बहुतायत मा अंतर का दर्शावत हैं। ग्रे डॉट्स जीन का इंगित करत हैं जेकर बहुतायत नमूना प्रकारन के बीच महत्वपूर्ण रूप से अलग नाहीं रही (पी-मान > 0.05)। रंगीन बिंदु बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर का इंगित करत हैं (पी-मान ≤ 0.05)। बहुतायत मा सबसे बड़ा अंतर वाले 20 जीन क्रमशः लाल अऊर हल्का नीला (नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना) मा देखावा गा है। नियंत्रण नमूना के तुलना मा नियंत्रण अऊर पीपीए नमूना मा पीले अऊर बैंगनी बिंदुओं के बहुतायत कम से कम 2.7 गुना अधिक रही। काला बिंदु काफी अलग बहुतायत वाले जीन का प्रतिनिधित्व करत हैं, जेहिमा -1 अऊर 1 के बीच औसत सीएलआर अंतर होत है। पी मानन के गणना मान-व्हिटनी यू परीक्षण का उपयोग कइके कीन गा रहा अऊर बेंजामिन-होचबर्ग प्रक्रिया का उपयोग कइके कई तुलना के लिए सही कीन गा रहा। जीन गैर-अनावश्यक जीन कैटलॉग मा प्रतिनिधि जीन से मेल खात हैं। जीन नामन मा केईजीजी चिन्ह होत है जवन एक केओ जीन का दर्शावत है। बोल्ड मीन सीएलआर अंतर काफी अलग बहुतायत का इंगित करत हैं। एक डैश (-) इंगित करत है कि केईजीजी डेटाबेस मा जीन के लिए कौनो प्रतीक नाहीं है।
पीपीए चयापचय अऊर/या उत्पादन से संबंधित जीन वाले करन का जीन के कॉन्टिग आईडी के साथ कॉन्टिग्स के टैक्सोनोमिक पहचान का मिलान कइके पहचाना गा रहा। जीनस स्तर पर, 130 जेनेरा मा पीपीए चयापचय से संबंधित जीन पावा गा अऊर 61 जेनेरा मा पीपीए उत्पादन से संबंधित जीन पावा गा (पूरक तालिका 4)। हालांकि, कौनो भी पीढ़ी बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर नाहीं देखाइस (पी > 0.05)।
प्रजाति के स्तर पर, 144 जीवाणु प्रजाति मा पीपीए चयापचय से जुड़े जीन पाए गए अऊर 68 जीवाणु प्रजाति मा पीपीए उत्पादन से जुड़े जीन पाए गए (पूरक तालिका 5)। पीपीए चयापचयकर्ताओं मा, आठ बैक्टीरिया नमूना प्रकारन के बीच बहुतायत मा महत्वपूर्ण वृद्धि देखाइस, अऊर सब प्रभाव मा महत्वपूर्ण बदलाव देखाइस (पूरक तालिका 6)। बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर वाले सब पहचाने गए पीपीए चयापचयकर्ता पीपीए नमूना मा अधिक प्रचुर मात्रा मा रहे। प्रजाति-स्तरीय वर्गीकरण से जेनेरा के प्रतिनिधियन का पता चला जवन नमूना प्रकारन के बीच महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नाहीं रहे, जेहिमा कई बैक्टीरोइड्स अऊर रुमिनोकोकस प्रजाति, साथ ही साथ डंकनिया डुबोइस, माइक्सोबैक्टीरियम एंटेरिका, मोनोकोकस पेक्टिनोलिटिकस अऊर अल्कालिजेन्स पॉलीमॉर्फा शामिल रहे। पीपीए-उत्पादक बैक्टीरिया मा, चार बैक्टीरिया नमूना प्रकारन के बीच बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर देखाइस। बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर वाली प्रजाति मा बैक्टीरॉइड्स नोवोरोसी, डंकनिया डुबोइस, माइक्सोबैक्टीरियम एंटेरिटिडिस अऊर रुमिनोकोकस बोविस शामिल रहे।
यहि अध्ययन मा, हम चूहों के आंत माइक्रोबायोटा पर पीपीए जोखिम के प्रभावन के जांच किहिन। पीपीए बैक्टीरिया मा अलग-अलग प्रतिक्रिया पैदा कइ सकत है काहे से कि ई कुछ प्रजाति द्वारा बनावा जात है, दूसर प्रजाति द्वारा खाद्य स्रोत के रूप मा उपयोग कीन जात है, या रोगाणुरोधी प्रभाव होत है। यहिसे, आहार पूरकता के माध्यम से आंत के वातावरण मा एकर जोड़ सहिष्णुता, संवेदनशीलता अऊर पोषक तत्व स्रोत के रूप मा एकर उपयोग करै के क्षमता के आधार पर अलग-अलग प्रभाव डाल सकत है। संवेदनशील जीवाणु प्रजातियन का खतम कीन जा सकत है अऊर ओनके जगह लीन जा सकत है जवन पीपीए के प्रति अधिक प्रतिरोधी हैं या खाद्य स्रोत के रूप मा उपयोग करै में सक्षम हैं, जेहिसे आंत माइक्रोबायोटा के संरचना मा बदलाव आवत है। हमरे परिणामन से माइक्रोबियल संरचना मा महत्वपूर्ण अंतर पता चला लेकिन समग्र माइक्रोबियल विविधता पर कौनो प्रभाव नाहीं पड़ा। सबसे बड़ा प्रभाव प्रजाति स्तर पर देखे गए, पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना (पूरक तालिका 2) के बीच 70 से अधिक कर बहुतायत मा काफी अलग रहे। पीपीए-उजागर नमूना के संरचना के आगे के मूल्यांकन से अनजान नमूना के तुलना मा माइक्रोबियल प्रजाति के अधिक विषमता का पता चला, जेसे पता चलत है कि पीपीए जीवाणु विकास विशेषताओं का बढ़ा सकत है अऊर जीवाणु आबादी का सीमित कर सकत है जवन पीपीए-समृद्ध वातावरण मा जीवित रह सकत है। यहिसे, पीपीए आंत माइक्रोबायोटा विविधता मा व्यापक व्यवधान पैदा करै के बजाय चुनिंदा रूप से बदलाव पैदा कइ सकत है।
पीपीए जइसन खाद्य संरक्षक पहिले समग्र विविधता का प्रभावित कीने बिना आंत माइक्रोबायोम घटकन के बहुतायत का बदलै के लिए देखा गा है (नागपाल एट अल।, 2021)। हिंया, हमने फ़ाइलम बैक्टीरोइडेट्स (पहिले बैक्टीरोइडेट्स के रूप मा जाना जात रहा) के भीतर बैक्टीरोइडेट्स प्रजाति के बीच सबसे हड़ताली अंतर देखिन, जवन पीपीए-उजागर चूहों मा काफी समृद्ध रहे। बैक्टीरॉइड्स प्रजाति के बढ़ल बहुतायत बढ़ल श्लेष्म क्षरण से जुड़ी अहै, जवन संक्रमण के जोखिम का बढ़ा सकत है अऊर सूजन का बढ़ावा दे सकत है (कॉर्निक एट अल., 2015; देसाई एट अल., 2016; पेन्ज़ोल एट अल., 2019)। एक अध्ययन से पता चला है कि बैक्टीरॉइड्स फ्रैगिलिस से इलाज कीन गा नवजात नर चूहों ने आत्मकेंद्रित स्पेक्ट्रम विकार (एएसडी) (कार्मेल एट अल।, 2023) के याद दिलावै वाले सामाजिक व्यवहार प्रदर्शित किहिन, अऊर अन्य अध्ययनन से पता चला है कि बैक्टीरॉइड्स प्रजाति प्रतिरक्षा गतिविधि का बदल सकत हैं अऊर ऑटोइम्यून भड़काऊ कार्डियोमायोपैथी (जी-एएसडी एट अल., 2023) का जन्म दे सकत हैं। 2019)। पीपीए (कोरेट्टी एट अल., 2018) के संपर्क मा आवै वाले चूहों मा रुमिनोकोकस, प्रीवोटेला अऊर पैराबैक्टीरॉइड्स प्रजाति से संबंधित प्रजाति भी काफी बढ़ गै रहीं। कुछ रुमिनोकोकस प्रजाति प्रोइंफ्लेमेटरी साइटोकाइन के उत्पादन के माध्यम से क्रोहन रोग जइसन बीमारियन से जुड़ी होत हैं (हेनके एट अल।, 2019), जबकि प्रीवोटेला ह्यूमैनी जइसन प्रीवोटेला प्रजाति उच्च रक्तचाप अऊर इंसुलिन संवेदनशीलता जइसन चयापचय रोगन से जुड़ी होत हैं (पीडरसन एट अल।, 2016; लि एट अल।, 2017)। अंत मा, हमने पावा कि बैक्टीरोइडेट्स (पहिले फर्मिक्यूट्स के रूप मा जाना जात रहा) का अनुपात बैक्टीरोइडेट्स प्रजाति के उच्च कुल बहुतायत के कारण नियंत्रण चूहों के तुलना मा पीपीए-उजागर चूहों मा काफी कम रहा। ई अनुपात पहिले आंत के होमियोस्टेसिस का एक महत्वपूर्ण संकेतक देखा गा है, अऊर ई अनुपात मा गड़बड़ी भड़काऊ आंत्र रोगन (स्टोजानोव एट अल., 2020) सहित विभिन्न रोग राज्यन (टर्पिन एट अल., 2016; ताकेजावा एट अल., 2021; एन एट अल., 2023) से जुड़ी रही है। सामूहिक रूप से, फ़ाइलम बैक्टीरोइडेट्स के प्रजाति बढ़े आहार पीपीए से सबसे ज्यादा प्रभावित दिखाई देत हैं। ई पीपीए के प्रति उच्च सहिष्णुता या पीपीए का ऊर्जा स्रोत के रूप मा उपयोग करै के क्षमता के कारण हो सकत है, जवन कम से कम एक प्रजाति, होयलेसेला एनोसिया (हिच एट अल।, 2022) के लिए सच देखा गा है। वैकल्पिक रूप से, मातृ पीपीए जोखिम माउस संतान के आंत का बैक्टीरोइडेट्स उपनिवेशीकरण के लिए अधिक संवेदनशील बनाके भ्रूण के विकास का बढ़ा सकत है; हालांकि, हमार अध्ययन डिजाइन अइसन आकलन के अनुमति नाहीं दिहिस।
मेटाजेनोमिक सामग्री आकलन से पीपीए चयापचय अऊर उत्पादन से जुड़े जीन के बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर पता चला, पीपीए-उजागर चूहों पीपीए उत्पादन के लिए जिम्मेदार जीन के उच्च बहुतायत प्रदर्शित करत हैं, जबकि गैर-पीपीए-उजागर चूहों पीएए चयापचय के लिए जिम्मेदार जीन के उच्च बहुतायत प्रदर्शित करत हैं (चित्र 6)। ई परिणाम बतावत हैं कि माइक्रोबियल संरचना पर पीपीए का प्रभाव केवल ओकरे उपयोग के कारण नाहीं हो सकत है, अन्यथा पीपीए चयापचय से जुड़े जीन के बहुतायत पीपीए-उजागर चूहों के आंत माइक्रोबायोम मा एक उच्च बहुतायत देखावै का चाही। एक व्याख्या ई है कि पीपीए पोषक तत्व के रूप मा बैक्टीरिया द्वारा उपयोग के बजाय मुख्य रूप से अपने रोगाणुरोधी प्रभावन के माध्यम से जीवाणु बहुतायत का मध्यस्थता करत है। पिछले अध्ययनन से पता चला है कि पीपीए खुराक-निर्भर तरीका से साल्मोनेला टाइफिमुरियम के विकास का रोकत है (जैकबसन एट अल., 2018)। पीपीए के उच्च सांद्रता के संपर्क मा बैक्टीरिया का चयन होइ सकत है जवन ओकरे रोगाणुरोधी गुणन के प्रतिरोधी हैं अऊर जरूरी नहीं कि ओका चयापचय या उत्पादन करै में सक्षम होंय। उदाहरण के लिए, कईयो पैराबैक्टीरॉइड्स प्रजाति पीपीए नमूना मा काफी अधिक बहुतायत देखाइन, लेकिन पीपीए चयापचय या उत्पादन से संबंधित कौनो जीन नाहीं पावा गा रहा (पूरक तालिका 2, 4 अऊर 5)। इसके अलावा, किण्वन उपोत्पाद के रूप मा पीपीए उत्पादन विभिन्न बैक्टीरिया के बीच व्यापक रूप से वितरित कीन जात है (गोंजालेज-गार्सिया एट अल।, 2017)। नियंत्रण नमूना (एवेरिना एट अल., 2020) मा पीपीए चयापचय से संबंधित जीन के उच्च बहुतायत का कारण उच्च जीवाणु विविधता हो सकत है। इसके अलावा, 1332 जीन में से केवल 27 (2.14%) जीन के पीपीए चयापचय से विशेष रूप से जुड़े जीन होए के भविष्यवाणी कीन गै रही। पीपीए चयापचय से जुड़े कईयो जीन अन्य चयापचय मार्गन मा भी शामिल हैं। ई आगे दर्शाता है कि पीपीए चयापचय मा शामिल जीन के बहुतायत नियंत्रण नमूना मा अधिक रही; ई जीन अइसन मार्गन मा काम कर सकत हैं जेकरे परिणामस्वरूप पीपीए उपयोग या उपोत्पाद के रूप मा गठन नाइ होत है। यहि मामला मा, पीपीए पीढ़ी से जुड़ा केवल एक जीन नमूना प्रकारन के बीच बहुतायत मा महत्वपूर्ण अंतर देखाइस। पीपीए चयापचय से जुड़े जीन के विपरीत, पीपीए उत्पादन के लिए मार्कर जीन का चयन कीन गा रहा काहे से कि उ पीपीए उत्पादन के लिए जीवाणु मार्ग मा सीधे शामिल हैं। पीपीए-उजागर चूहों मा, सब प्रजातियन मा पीपीए पैदा करै के बहुतायत अऊर क्षमता मा काफी वृद्धि पावा गा रहा। ई भविष्यवाणी का समर्थन करत है कि पीपीए पीपीए उत्पादकन का चयन करिहैं अऊर यहिसे भविष्यवाणी करिहैं कि पीपीए उत्पादन क्षमता बढ़ जाई। हालांकि, जीन बहुतायत जरूरी नहीं कि जीन अभिव्यक्ति से सहसंबद्ध हो; यहिसे, यद्यपि पीपीए चयापचय से जुड़े जीन के बहुतायत नियंत्रण नमूना मा अधिक है, अभिव्यक्ति दर अलग हो सकत है (शी एट अल।, 2014)। पीपीए-उत्पादक जीन के प्रसार अऊर पीपीए उत्पादन के बीच संबंध के पुष्टि करै के लिए, पीपीए उत्पादन मा शामिल जीन के अभिव्यक्ति के अध्ययन के जरूरत है।
पीपीए अऊर नियंत्रण मेटाजेनोम के कार्यात्मक एनोटेशन से कुछ अंतर पता चला। जीन सामग्री के पीसीए विश्लेषण से पीपीए अऊर नियंत्रण नमूना के बीच असतत समूहन का पता चला (चित्र 5)। नमूना के भीतर क्लस्टरिंग से पता चला कि नियंत्रण जीन सामग्री अधिक विविध रही, जबकि पीपीए नमूना एक साथ क्लस्टर किहिन। जीन सामग्री द्वारा क्लस्टरिंग प्रजाति संरचना द्वारा क्लस्टरिंग के तुलनीय रहा। यहिसे, मार्ग बहुतायत मा अंतर विशिष्ट प्रजाति अऊर ओनके भीतर उपभेदन के बहुतायत मा बदलाव के अनुरूप हैं। पीपीए नमूना मा, काफी अधिक बहुतायत वाले दुई मार्ग अमीनोशुगर/न्यूक्लियोटाइड शुगर चयापचय (ko:K21279) अऊर कईयो लिपिड चयापचय मार्ग (ko:K00647, ko:K03801; पूरक तालिका 3) से संबंधित रहे। ko:K21279 से जुड़े जीन जीनस बैक्टीरोइड्स से जुड़े होए के लिए जाने जात हैं, जे पीपीए नमूना मा प्रजातियन के काफी अधिक संख्या वाले जेनेरा में से एक है। ई एंजाइम कैप्सुलर पॉलीसैकराइड्स (वांग एट अल., 2008) का व्यक्त कइके प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से बच सकत है। ई पीपीए-उजागर चूहों मा देखे गए बैक्टीरोइडेट्स मा वृद्धि का कारण हो सकत है। ई पीपीए माइक्रोबायोम मा देखे गए फैटी एसिड संश्लेषण मा वृद्धि का पूरक है। बैक्टीरिया फैटी एसिड पैदा करै के लिए FASIIko:K00647 (fabB) मार्ग का उपयोग करत हैं, जवन मेजबान चयापचय मार्गन का प्रभावित कर सकत हैं (याओ अऊर रॉक, 2015; जॉनसन एट अल।, 2020), अऊर लिपिड चयापचय मा बदलाव न्यूरोडेवलपमेंट मा भूमिका निभा सकत हैं (यू एट अल।, 2020)। पीपीए नमूना मा बढ़ी हुई बहुतायत देखावै वाला एक अउर मार्ग स्टेरॉयड हार्मोन जैव संश्लेषण (ko:K12343) रहा। बढ़त साक्ष्य अहै कि आंत माइक्रोबायोटा के हार्मोन के स्तर का प्रभावित करै अऊर हार्मोन से प्रभावित होवे के क्षमता के बीच एक उल्टा संबंध है, जइसे कि ऊंचा स्टेरॉयड स्तर के डाउनस्ट्रीम स्वास्थ्य परिणाम होइ सकत हैं (टेटेल एट अल।, 2018)।
ई अध्ययन सीमा अऊर विचारन के बिना नाहीं है। एक महत्वपूर्ण अंतर ई है कि हम जानवरन के शारीरिक आकलन नाहीं किहिन। यहिसे, ई सीधे निष्कर्ष निकालब संभव नाहीं है कि माइक्रोबायोम मा बदलाव कौनो बीमारी से जुड़ा अहै। एक अउर विचार ई है कि ई अध्ययन मा चूहों का ओनके महतारी के समान आहार खिलावा गा रहा। भविष्य के अध्ययन ई निर्धारित कर सकत हैं कि का पीपीए-समृद्ध आहार से पीपीए-मुक्त आहार मा बदलै से माइक्रोबायोम पर ओकर प्रभाव में सुधार होत है। हमरे अध्ययन के एक सीमा, कईयो अन्यन के तरह, सीमित नमूना आकार है। यद्यपि वैध निष्कर्ष निकाला जा सकत है, लेकिन परिणामन का विश्लेषण करत समय एक बड़ा नमूना आकार अधिक सांख्यिकीय शक्ति प्रदान करि। हम आंत माइक्रोबायोम मा बदलाव अऊर कौनो भी बीमारी के बीच संबंध के बारे मा निष्कर्ष निकालै के बारे मा भी सावधान हैं (याप एट अल।, 2021)। उम्र, लिंग अऊर आहार सहित भ्रमित करै वाले कारक सूक्ष्मजीवन के संरचना का काफी प्रभावित कइ सकत हैं। ई कारक जटिल रोगन के साथे आंत माइक्रोबायोम के संबंध के बारे मा साहित्य मा देखे गए असंगति के व्याख्या कर सकत हैं (जॉनसन एट अल., 2019; लागोड अऊर नासर, 2023)। उदाहरण के लिए, जीनस बैक्टीरोइडेट्स के सदस्यन का एएसडी वाले जानवरन अऊर मनुष्यन मा या तौ बढ़ल या घटत देखा गा है (एंजेलिस एट अल।, 2013; कुशक एट अल।, 2017)। इसी तरह, भड़काऊ आंत्र रोग वाले मरीजन मा आंत संरचना के अध्ययनन मा एकै कर मा वृद्धि अऊर कमी दुनौ पावा गा है (वाल्टर्स एट अल., 2014; फोर्ब्स एट अल., 2018; उपाध्याय एट अल., 2023)। लिंग पूर्वाग्रह के प्रभाव का सीमित करै के लिए, हम लिंगन के समान प्रतिनिधित्व सुनिश्चित करै के कोशिश किहिन ताकि अंतर सबसे अधिक संभावना आहार से प्रेरित होइ। कार्यात्मक एनोटेशन के एक चुनौती अनावश्यक जीन अनुक्रमन का हटावै है। हमार जीन क्लस्टरिंग विधि के लिए 95% अनुक्रम पहचान अऊर 85% लंबाई समानता के साथ-साथ गलत क्लस्टरिंग का खतम करै के लिए 90% संरेखण कवरेज के आवश्यकता होत है। हालांकि, कुछ मामलन मा, हम एकै एनोटेशन (जैसे, एमयूटी) (चित्र 6) के साथ सीओजी देखेन। ई निर्धारित करै के लिए आगे के अध्ययनन के जरूरत है कि का ई ऑर्थोलॉग अलग-अलग हैं, विशिष्ट जेनेरा से जुड़े हैं, या का ई जीन क्लस्टरिंग दृष्टिकोण के सीमा है। कार्यात्मक एनोटेशन के एक अउर सीमा संभावित गलत वर्गीकरण है; जीवाणु जीन एमएमडीए एक ज्ञात एंजाइम है जवन प्रोपियोनेट संश्लेषण मा शामिल है, लेकिन केईजीजी एकरा प्रोपियोनेट चयापचय मार्ग से नाहीं जोड़त है। यहिके विपरीत, scpB अऊर mmcD ऑर्थोलॉग संबंधित हैं। नामित नॉकआउट के बिना जीन के बड़ी संख्या के परिणामस्वरूप जीन बहुतायत का आकलन करत समय पीपीए से संबंधित जीन के पहचान करै में असमर्थता हो सकत है। भविष्य के अध्ययन मेटाट्रांसक्रिप्टोम विश्लेषण से लाभान्वित होइहैं, जवन आंत माइक्रोबायोटा के कार्यात्मक विशेषता के गहरी समझ प्रदान कइ सकत है अऊर जीन अभिव्यक्ति का संभावित डाउनस्ट्रीम प्रभावन से जोड़ सकत है। विशिष्ट न्यूरोडेवलपमेंटल विकार या भड़काऊ आंत्र रोग से जुड़े अध्ययनन के लिए, इन विकारन से माइक्रोबायोम संरचना मा बदलाव का जोड़ै के लिए जानवरन के शारीरिक अऊर व्यवहारिक आकलन के जरूरत है। रोगाणु मुक्त चूहों में आंत माइक्रोबायोम का प्रत्यारोपण करै वाले अतिरिक्त अध्ययन ई निर्धारित करै के लिए भी उपयोगी होइहैं कि माइक्रोबायोम रोग का चालक या विशेषता है।
संक्षेप मा, हमने देखावा कि आहार पीपीए आंत माइक्रोबायोटा के संरचना का बदलै मा एक कारक के रूप मा काम करत है। पीपीए एक एफडीए-अनुमोदित संरक्षक है जवन व्यापक रूप से विभिन्न खाद्य पदार्थन मा पावा जात है, जवन दीर्घकालिक जोखिम पर, सामान्य आंत वनस्पति के व्यवधान का कारण बन सकत है। हमने कई बैक्टीरिया के बहुतायत मा बदलाव पावा, जेसे पता चलत है कि पीपीए आंत माइक्रोबायोटा के संरचना का प्रभावित कइ सकत है। माइक्रोबायोटा मा बदलाव से कुछ चयापचय मार्गन के स्तर मा बदलाव होइ सकत है, जवन शारीरिक बदलाव का जन्म दे सकत है जवन मेजबान स्वास्थ्य से प्रासंगिक हैं। ई निर्धारित करै के लिए आगे के अध्ययनन के जरूरत है कि का माइक्रोबियल संरचना पर आहार पीपीए के प्रभाव डिस्बायोसिस या अन्य बीमारियन का जन्म दे सकत हैं। ई अध्ययन भविष्य के अध्ययनन के लिए नींव रखत है कि आंत संरचना पर पीपीए प्रभाव मानव स्वास्थ्य का कैसे प्रभावित कर सकत है।
यहि अध्ययन मा प्रस्तुत डेटासेट ऑनलाइन भंडार मा उपलब्ध हैं। भंडार नाम अऊर प्रवेश संख्या हैं: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/, PRJNA1092431.
ई पशु अध्ययन का सेंट्रल फ्लोरिडा विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल अऊर उपयोग समिति (यूसीएफ-आईएसीयूसी) (पशु उपयोग परमिट संख्या: PROTO202000002) द्वारा अनुमोदित कीन गा रहा। ई अध्ययन स्थानीय कानून, विनियमन अऊर संस्थागत आवश्यकताओं का अनुपालन करत है।
एनजी: अवधारणा, डेटा क्यूरेशन, औपचारिक विश्लेषण, जांच, पद्धति, सॉफ्टवेयर, दृश्य, लेखन (मूल मसौदा), लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। एलए: अवधारणा, डेटा क्यूरेशन, पद्धति, संसाधन, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। एसएच: औपचारिक विश्लेषण, सॉफ्टवेयर, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। एसए: जांच, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। मुख्य न्यायाधीश: जांच, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। एसएन: अवधारणा, परियोजना प्रशासन, संसाधन, पर्यवेक्षण, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)। टीए: अवधारणा, परियोजना प्रशासन, पर्यवेक्षण, लेखन (समीक्षा अऊर संपादन)।
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