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उच्च लोडिंग सामग्री वाले इंसुलिन नैनोकण (एनपी) का अलग-अलग खुराक रूपन मा अलग-अलग अनुप्रयोग मिले हैं। ई काम का उद्देश्य इंसुलिन-लोडेड काइटोसन नैनोकणन के संरचना पर फ्रीज-ड्राईंग अऊर स्प्रे-ड्राईंग प्रक्रियाओं के प्रभाव का मूल्यांकन करब है, क्रायोप्रोटेक्टेंट के रूप मा मैनिटोल के साथ या बिना। हम इन नैनोकणन के गुणवत्ता का भी आकलन किहिन। निर्जलीकरण, काइटोसन/सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट/इंसुलिन क्रॉस-लिंक्ड नैनोकणन के कण आकार 318 एनएम होवे के लिए अनुकूलित कीन गा रहा, पीडीआई 0.18 रहा, एनकैप्सुलेशन दक्षता 99.4% रहा, अऊर लोडिंग 25.01% रहा। पुनर्गठन के बाद, सब नैनोकणन का छोड़ि के, मुक्त-कण विधियन से उत्पादन कीन गा रहा मैनिटोल के उपयोग के बिना, अपनी गोलाकार कण संरचना का बनाए रखिन। या तौ स्प्रे द्वारा निर्जलित मैनिटोल युक्त नैनोकणन के तुलना मा, मैनिटोल-मुक्त स्प्रे-सूखे नैनोकणन ने भी सबसे छोट औसत कण आकार (376 एनएम) अऊर सबसे अधिक लोडिंग सामग्री (25.02%) समान एनकैप्सुलेशन दर (पीडीआई) अऊर पीडीआई987 के साथ देखावा। (0.20) सुखावैं या फ्रीज-ड्राईंग तकनीकन से। मैनिटोल के बिना स्प्रे ड्राईंग से सूखे नैनोकणन के परिणामस्वरूप इंसुलिन के सबसे तेजी से रिलीज अऊर सेलुलर अपटेक के सबसे उच्च दक्षता भी मिली। ई काम से पता चलत है कि स्प्रे ड्राईंग क्रायोप्रोटेक्टेंट के जरूरत के बिना इंसुलिन नैनोकणन का निर्जलित कइ सकत है, पारंपरिक विधियन के तुलना मा मुक्त करै के तरीकन से महान लोडिंग बनावत है, क्षमता, कम योगात्मक आवश्यकता अऊर संचालन लागत महत्वपूर्ण लाभ।
19221,2,3 मा अपनी खोज के बाद से, इंसुलिन अऊर ओकर औषधीय तैयारियन ने टाइप 1 मधुमेह (टी 1 डी एम) अऊर टाइप 2 मधुमेह (टी 1 डी एम) के मरीजन के जीवन बचावा है। हालांकि, एक उच्च आणविक भार प्रोटीन के रूप मा अपने गुणन के कारण, इंसुलिन आसानी से एकत्रित कीन जात है, प्रोटिओलाइटिक एंजाइम द्वारा टूट जात है, पेस्पिस द्वारा सबसे पहिले निदान कीन जात है अऊर निदान से खतम कीन जात है। टाइप 1 मधुमेह के साथ अपने बाकी जीवन के लिए इंसुलिन इंजेक्शन के आवश्यकता होत है। टाइप 2 मधुमेह के साथ शुरू में निदान कीन गा कईयो मरीजन का दीर्घकालिक इंसुलिन इंजेक्शन के भी आवश्यकता होत है। दैनिक इंसुलिन इंजेक्शन इन व्यक्तियन के लिए दैनिक दर्द अऊर असुविधा का एक गंभीर स्रोत होत है, जेकर मानसिक स्वास्थ्य पर नकारात्मक प्रभाव पड़त है। नतीजतन, इंसुलिन प्रशासन के अन्य रूप जवन कम असुविधा पैदा करत हैं, जइसे कि व्यापक रूप से प्रशासनिक असुविधा अध्ययन किहिन5 काहे से कि ओनके पास दुनिया भर मा मधुमेह से पीड़ित लगभग 5 अरब लोगन के जीवन के गुणवत्ता का बहाल करै के क्षमता है।
नैनोकण प्रौद्योगिकी ने मौखिक इंसुलिन लेवे के प्रयासन मा एक महत्वपूर्ण प्रगति प्रदान कीन है4,6,7। एक जवन विशिष्ट शरीर साइटन मा लक्षित वितरण के लिए इंसुलिन का गिरावट से प्रभावी ढंग से संलग्न अऊर बचावत है। हालांकि, नैनोकण फॉर्मूलेशन के उपयोग मा कईयो सीमाएं हैं, मुख्य रूप से कण निलंबन के स्थिरता मुद्दन के कारण। कुछ एकत्रीकरण हो सकत हैं, जेहिसे जैव उपलब्धता कम होइ जात है इंसुलिन-लोडेड नैनोकण8. यहिके अलावा, इंसुलिन नैनोकण (एनपी) के स्थिरता सुनिश्चित करै के लिए नैनोकण अऊर इंसुलिन के बहुलक मैट्रिक्स के रासायनिक स्थिरता पर भी विचार कीन जाय का चाही। वर्तमान मा, भंडारण के दौरान अवांछित परिवर्तनन का रोकै के साथ-साथ स्थिर एनपी बनावै के लिए फ्रीज-ड्राईंग तकनीक स्वर्ण मानक है9।
हालांकि, फ्रीज-ड्राईंग के लिए क्रायोप्रोटेक्टेंट के जोड़े के आवश्यकता होत है ताकि एनपी के गोलाकार संरचना का बर्फ के क्रिस्टल के यांत्रिक तनाव से प्रभावित होवे से रोका जा सके। ई लाइओफाइलाइजेशन के बाद इंसुलिन नैनोकणन के लोडिंग का काफी कम करत है, काहे से कि क्रायोप्रोटेक्टेंट अधिकांश वजन अनुपात पर कब्जा करत है। एहसे एनपी अक्सर इंसुलिन के उत्पादन के लिए पावा जात है। इंसुलिन के चिकित्सीय खिड़की प्राप्त करै के लिए बड़ी मात्रा मा सूखे नैनोकणन के आवश्यकता के कारण, मौखिक गोलियन अऊर मौखिक फिल्मन जइसन सूखे पाउडर फॉर्मूलेशन के निर्माण के लिए अनुपयुक्त है।
दवा उद्योग मा तरल चरणन से सूखे पाउडर के उत्पादन के लिए स्प्रे ड्राईंग एक प्रसिद्ध अऊर सस्ता औद्योगिक पैमाने पर प्रक्रिया है10,11। कण निर्माण प्रक्रिया पर नियंत्रण कईयो जैव सक्रिय यौगिकन के उचित एनकैप्सुलेशन के अनुमति देत है 12, 13 . इसके अलावा, ई प्रोटीन या कैप्सूलित प्रोटीन के तैयारी के लिए एक प्रभावी तकनीक बन गवा है प्रशासन। स्प्रे सुखावै के दौरान, पानी बहुत जल्दी वाष्पित होइ जात है, जवन कण कोर के तापमान का कम रखै मा मदद करत है11,14, जेहिसे एकर अनुप्रयोग गर्मी-संवेदनशील घटकन का संलग्न करै में सक्षम होइ जात है। स्प्रे सुखावै से पहिले, कोटिंग सामग्री का संलग्न अवयव युक्त घोल के साथ पूरी तरह से समरूप बनावा जाय, जइसे कि फ्रीज हो जात है। स्प्रे-ड्राईंग मा एनकैप्सुलेशन से पहिले समरूपता निर्जलीकरण के दौरान एनकैप्सुलेशन दक्षता में सुधार करत है। चूंकि स्प्रे-ड्राईंग एनकैप्सुलेशन प्रक्रिया मा क्रायोप्रोटेक्टेंट के जरूरत नाहीं होत है, स्प्रे-ड्राईंग का उपयोग उच्च लोडिंग सामग्री के साथ सूखे एनपी का उत्पादन करै के लिए कीन जा सकत है।
ई अध्ययन एक आयन जेल विधि का उपयोग कइके काइटोसन अऊर सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट के क्रॉस-लिंकिंग द्वारा इंसुलिन-लोडेड एनपी के उत्पादन के रिपोर्ट करत है। आयन जेलेशन एक तैयारी विधि है जवन कुछ परिस्थितियन मा दु या दु से अधिक आयनिक प्रजाति के बीच इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन के माध्यम से नैनोकणन के उत्पादन के अनुमति देत है। अनुकूलित डिहाइड्राईजिंग अऊर स्प्रे-ड्राई तकनीक दुनौ का उपयोग कीन गा रहा। काइटोसन/सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट/इंसुलिन क्रॉस-लिंक्ड नैनोकण। निर्जलीकरण के बाद, ओनके आकृति विज्ञान का एसईएम द्वारा विश्लेषण कीन गा रहा। ओनके पुनर्संयोजन क्षमता का मूल्यांकन ओनके आकार वितरण, सतह आवेश, पीडीआई, एनकैप्सुलेशन दक्षता अऊर लोडिंग सामग्री का माप के द्वारा कीन गा रहा। इंसुलिन के निर्जलीकरण विधियन से उत्पादित रिज़ॉल्यूबिलाइज्ड नैनोकणन के गुणवत्ता का भी मूल्यांकन ओनके निर्जलीकरण विधियन से कीन गा रहा। सुरक्षा, रिलीज व्यवहार अऊर सेलुलर अपटेक प्रभावकारिता।
मिश्रित घोल का पीएच अऊर काइटोसन अऊर इंसुलिन का अनुपात दुई प्रमुख कारक हैं जवन अंतिम एनपी के कण आकार अऊर एनकैप्सुलेशन दक्षता (ईई) का प्रभावित करत हैं, काहे से कि उ सीधे आयनोट्रोपिक जेलेशन प्रक्रिया का प्रभावित करत हैं। मिश्रित घोल के पीएच कण आकार अऊर एनकैप्सुलेशन दक्षता के साथ अत्यधिक सहसंबद्ध देखा गा रहा (चित्र 1 ए, चित्र 1 ए से पीएच मा वृद्धि के रूप मा देखा गा है)। 4.0 से 6.0 तक, औसत कण आकार (एनएम) कम होइ गवा अऊर ईई मा काफी वृद्धि भै, जबकि जब पीएच 6.5 तक बढ़ि गवा, तौ औसत कण आकार बढ़ै लाग अऊर ईई अपरिवर्तित रहा। जैसे-जैसे इंसुलिन से काइटोसन का अनुपात बढ़त है, औसत कण आकार भी बढ़ जात है। इसके अलावा, जब कण कणन मा ईई मा कौनो बदलाव नाहीं देखा गा रहा। काइटोसन/इंसुलिन का द्रव्यमान अनुपात 2.5:1 (डब्ल्यू/डब्ल्यू) (चित्र 1 बी) से अधिक है। यहिसे, यहि अध्ययन मा इष्टतम तैयारी परिस्थितियन (पीएच 6.0, काइटोसन/इंसुलिन द्रव्यमान अनुपात 2.5:1) का उपयोग आगे के अध्ययन के लिए इंसुलिन-लोडेड नैनोकणन का तैयार करै के लिए कीन गा रहा। यहि तैयारी के स्थिति के तहत, इंसुलिन कण के औसत आकार का अनुकूलित करै के लिए नैनोकणन का अनुकूलित कीन गा रहा। 318 एनएम (चित्र 1 सी), पीडीआई 0.18 रहा, एम्बेडिंग दक्षता 99.4% रही, ज़ीटा विभव 9.8 एमवी रहा, अऊर इंसुलिन लोडिंग 25.01% (एम/एम) रहा। संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम) परिणामन के आधार पर, अनुकूलित नैनोकण अपेक्षाकृत एकसमान गोलाकार अऊर अपेक्षाकृत असतत आकार के साथ रहे (चित्र। 1घ)।
इंसुलिन नैनोकणन का पैरामीटर अनुकूलन: (क) इंसुलिन नैनोकणन के औसत व्यास अऊर एनकैप्सुलेशन दक्षता (ईई) पर पीएच का प्रभाव (काइटोसन अऊर इंसुलिन के 5:1 द्रव्यमान अनुपात मा तैयार कीन गा है); (ख) काइटोसन अऊर इंसुलिन एनपी (पीएच 6 पर तैयार) के औसत व्यास अऊर एनकैप्सुलेशन दक्षता (ईई) पर इंसुलिन के द्रव्यमान अनुपात का प्रभाव; (ग) अनुकूलित इंसुलिन नैनोकणन के कण आकार वितरण; (घ) अनुकूलित इंसुलिन एनपी का टीईएम माइक्रोग्राफ।
ई सर्वविदित है कि काइटोसन 6.5 के पीकेए के साथ एक कमजोर पॉलीइलेक्ट्रोलाइट है। ई अम्लीय मीडिया मा सकारात्मक रूप से आवेशित होत है काहे से कि एकर मुख्य अमीनो समूह हाइड्रोजन आयन द्वारा प्रोटॉनीकृत होत है15। यहिसे, ई अक्सर नकारात्मक रूप से आवेशित मैक्रोमोलेक्यूल्स का संलग्न करै के लिए एक वाहक के रूप मा उपयोग कीन जात है। यहि अध्ययन मा, काइटोसन का उपयोग इंसुलिन के आइसोलेक्ट्रिक बिन्दु के साथ संलग्न करै के लिए कीन गा रहा। 5.3.चूंकि काइटोसन का उपयोग कोटिंग सामग्री के रूप मा कीन जात है, यहिके अनुपात मा वृद्धि के साथ, नैनोकणन के बाहरी परत के मोटाई तदनुसार बढ़ जात है, जेकरे परिणामस्वरूप एक बड़ा औसत कण आकार होत है। यहिके अलावा, काइटोसन के उच्च स्तर अधिक इंसुलिन का संलग्न कइ सकत हैं। हमरे मामले मा, ईई सबसे अधिक रहा जब चिटोसन अऊर इंसुलिन का अनुपात 25 तक पहुँचा, अऊर वहिमा कौनो महत्वपूर्ण बदलाव नाहीं रहा। ईई मा जब अनुपात बढ़त रहा।
काइटोसन अऊर इंसुलिन के अनुपात के अलावा, पीएच ने एनपी के तैयारी मा भी एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई। गन एट अल। 17 ने काइटोसन नैनोकणन के कण आकार पर पीएच के प्रभाव का अध्ययन किहिन। उइ कण आकार मा लगातार कमी पाए जब तक कि पीएच 6.0 तक नाहीं पहुँच जात रहा, अऊर पीएच > 6.0 पर कण आकार मा महत्वपूर्ण वृद्धि देखी गै रही, जवन हमरे अवलोकन के अनुरूप है। ई घटना यहि तथ्य के कारण है कि बढ़त पीएच के साथ, इंसुलिन अणु सतह पर नकारात्मक आवेश प्राप्त करत है, जेहिसे नकारात्मक आवेश होत है काइटोसन/सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट (टीपीपी) कॉम्प्लेक्स के साथ इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन, जेकरे परिणामस्वरूप छोट कण आकार अऊर उच्च ईई होत है। हालांकि, जब पीएच का 6.5 तक समायोजित कीन गा रहा, तौ काइटोसन पर अमीनो समूहन का डिप्रोटोनेट कीन गा रहा, जेकरे परिणामस्वरूप काइटोसन फोल्डिंग होत रहा। यहिसे, उच्च पीएच के परिणामस्वरूप टीपीपी के अमीनो आयनन के कम संपर्क होत है अऊर इंसुलिन के क्रॉस-लोकिंग कम होत है। अंतिम औसत कण आकार अऊर निचला ईई।
फ्रीज-ड्राई अऊर स्प्रे-ड्राई एनपी के रूपात्मक गुणन के विश्लेषण बेहतर निर्जलीकरण अऊर पाउडर निर्माण तकनीकन के चयन का मार्गदर्शन कर सकत है। पसंदीदा विधि का मूल घोल मा दवा स्थिरता, एक समान कण आकार, उच्च दवा लोडिंग अऊर अच्छा घुलनशीलता प्रदान करै का चाही। यहि अध्ययन मा, दुइनौ तकनीकन के बेहतर तुलना करै के लिए, निर्जलीकरण के दौरान 1% एनपी के बिना इंसुलिन एनपी का उपयोग कीन गा रहा। फ्रीज ड्राइंग अऊर स्प्रे ड्राईंग के लिए विभिन्न सूखे पाउडर फॉर्मूलेशन मा एक थोक एजेंट या क्रायोप्रोटेक्टेंट के रूप मा उपयोग कीन जात है। मैनिटोल के बिना लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन नैनोकणन के लिए, जैसा कि चित्र 2 ए मा देखा गा है, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉनस्कोनिंग इलेक्ट्रॉनस्कोनिंग माइक्रोस्कोनिंग (एसईएम कण देखे गए) के तहत बड़ी, अनियमित अऊर खुरदरी सतह के साथ एक अत्यधिक झरझरा पाउडर संरचना देखी गै रही। निर्जलीकरण के बाद पाउडर मा पावा गा (चित्र 2 ई)। ई परिणामन से पता चला कि अधिकांश एनपी बिना कौनो क्रायोप्रोटेक्टेंट के फ्रीज-ड्राईंग के दौरान विघटित होइ गें। 1% मैनिटोल युक्त फ्रीज-ड्राई अऊर स्प्रे-ड्राई इंसुलिन नैनोकणन के लिए, चिकनी सतह वाले गोलाकार नैनोकण देखे गए (चित्र 2, इन्फुलिन)। मैनिटोल के बिना स्प्रे-सूखे नैनोकण गोलाकार रहे लेकिन सतह पर झुर्रीदार रहे (चित्र 2 सी)। गोलाकार अऊर झुर्रीदार सतहन के बारे मा नीचे रिलीज व्यवहार अऊर सेलुलर अपटेक परीक्षणन मा आगे चर्चा कीन जात है। सूखे एनपी के दृश्यमान उपस्थिति के आधार पर, मैनिटोल के बिना स्प्रे-सूखे एनपी अऊर मैनिटोल के बिना स्प्रे-सूखे एनपी अऊर फ्रीज-सूखे एनपी दुनौ महीन एनपी पाउडर (चित्र 2f,g,h) पैदा किहिन। कण सतहन के बीच सतह क्षेत्र जेतना बड़ा होई, घुलनशीलता ओतना ही अधिक होई अऊर यहिसे रिलीज दर ओतना ही अधिक होई।
विभिन्न निर्जलित इंसुलिन एनपी के आकृति विज्ञान: (क) मैनिटोल के बिना लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ख) मैनिटोल के साथ लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ग) मैनिटोल एसईएम छवि के बिना स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी; (घ) मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ङ) मैनिटोल के बिना लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन एनपीएस पाउडर के छवि; (च) मैनिटोल के साथ लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन एनपी के छवि; (जी) मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपीएस पाउडर के छवि; (ज) मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपीएस पाउडर के छवि।
फ्रीज-ड्राईंग के दौरान, मैनिटोल एक क्रायोप्रोटेक्टेंट के रूप मा काम करत है, एनपी का एक अनाकार रूप मा रखत है अऊर बर्फ के क्रिस्टल द्वारा क्षति से बचावत है19। एकरे विपरीत, स्प्रे ड्राईंग के दौरान कौनो फ्रीजिंग स्टेप नाहीं होत है। यहिसे मैनिटोल के यहि विधि मा आवश्यकता नाहीं है। वास्तव मा, मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई एनपी पहिले के रूप मा फाइनल एनपी के रूप मा पैदा करत हैं वर्णित। हालांकि, मैनिटोल अबहियों एनपी का एक अउर गोलाकार संरचना देय के लिए स्प्रे-ड्राईंग प्रक्रिया मा एक भराव के रूप मा काम कर सकत है20 (चित्र 2डी), जवन अइसन संलग्न एनपी के एक समान रिलीज व्यवहार प्राप्त करै में मदद करत है। यहिके अलावा, ई स्पष्ट है कि कुछ बड़े कणन का फ्रीज-ड्राई अऊर स्प्रे-ड्राई इंसुलिन युक्त मैनिटोल (चित्र 2 डी) दुइनौ मा पता लगावा जा सकत है। 2b,d), जवन कैप्सूलित इंसुलिन के साथे कण कोर मा मैनिटोल के संचय के कारण हो सकत है। टू.काइटोसन परत। ई ध्यान देय लायक है कि यहि अध्ययन मा, ई सुनिश्चित करै के खातिर कि निर्जलीकरण के बाद गोलाकार संरचना बरकरार रही, मैनिटोल अऊर काइटोसन का अनुपात 5:1 पर रखा जात है, ताकि एक बड़ी मात्रा मा भराव भी सूखे एनपी के कण आकार का बड़ा कइ सकै।
फूरियर ट्रांसफॉर्म इन्फ्रारेड एटेन्यूएटेड टोटल रिफ्लेक्शन (एफटीआईआर-एटीआर) स्पेक्ट्रोस्कोपी ने मुक्त इंसुलिन, काइटोसन, काइटोसन, टीपीपी अऊर इंसुलिन के भौतिक मिश्रण का चिह्नित करा। सब निर्जलित एनपी का एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग कइके चिन्हित कीन गा रहा। उल्लेखनीय रूप से, 1641, 1543 अऊर 142 सेमी के बैंड तीव्रता कैप्सूल मा देखल गै रहा। मैनिटोल के साथ फ्रीज-ड्राई अऊर एनपी मा मैनिटोल के साथ अऊर बिना स्प्रे-ड्राई (चित्र 3)। जैसा कि पहिले बतावा गा रहा, ताकत मा ई वृद्धि काइटोसन, टीपीपी अऊर इंसुलिन के बीच क्रॉस-लिंकिंग से जुड़ी रही। काइटोसन अऊर इंसुलिन के बीच बातचीत के जांच से पता चला कि इंसुलिन-लोडेड चिटोसन के चिटोसन के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा मा, इंसुलिन के साथ चिटोसन के बैंड से ऊपर कार्बोनिल तीव्रता (1641 सेमी-1) अऊर अमीन (1543 सेमी-1) बेल्ट का बढ़ावत अहै। टीपीपी के ट्राइपोलीफॉस्फेट समूह काइटोसन मा अमोनियम समूहन से जुड़े अहैं, जवन 1412 सेमी-1 पर एक बैंड बनावत अहै।
मुक्त इंसुलिन, काइटोसन, काइटोसन/टीपीपी/इंसुलिन के भौतिक मिश्रण अऊर अलग-अलग विधियन से निर्जलित एनपी के एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रा।
इसके अलावा, ई परिणाम एसईएम मा देखावा गा परिणामन के अनुरूप हैं, जेहिसे पता चला कि संलग्न एनपी मैनिटोल के साथ छिड़काव अऊर फ्रीज-ड्राई करै पर दुनौ बरकरार रहे, लेकिन मैनिटोल के अभाव मा, केवल स्प्रे-ड्राईंग से कैप्सूलित कण पैदा भए। यहिके विपरीत, मैनिटोल के बिना फ्रीज-ड्राई के एफटीआईआर-एटीआर वर्णक्रमीय परिणाम बहुत समान रहे। काइटोसन, टीपीपी अऊर इंसुलिन का भौतिक मिश्रण। ई परिणाम बतावत है कि काइटोसन, टीपीपी अऊर इंसुलिन के बीच क्रॉस-लिंक अब मैनिटोल के बिना फ्रीज-ड्राई एनपी मा मौजूद नाहीं हैं। एनपी संरचना क्रायोप्रोटेक्टेंट के बिना फ्रीज-ड्राई के दौरान नष्ट होइ गै रही, जेका एसईएम परिणामन मा देखल जा सकत है (चित्र 2 ए एफटी अऊर डीएआईआर परिणामन के नष्ट आकृति विज्ञान)। इंसुलिन एनपी, केवल लाइओफाइलाइज्ड, स्प्रे-ड्राई अऊर मैनिटोल-फ्री एनपी का उपयोग पुनर्गठन प्रयोगन अऊर मैनिटोल-फ्री एनपी के लिए निर्जलीकरण के दौरान मैनिटोल-फ्री एनपी के अपघटन के कारण कीन गा रहा। चर्चा करब।
निर्जलीकरण का उपयोग दीर्घकालिक भंडारण अऊर अन्य सूत्रन मा पुन: संसाधित करै के लिए कीन जात है। भंडारण के बाद पुनर्गठन करै के लिए सूखे एनपी के क्षमता अलग-अलग सूत्रन जइसे कि गोलियन अऊर फिल्मन मा उनके उपयोग के लिए महत्वपूर्ण है। हमने देखा कि मैनिटोल के अभाव मा स्प्रे-सूखे इंसुलिन एनपी के औसत कण आकार पुनर्गठन के बाद केवल थोड़ा सा बढ़ गवा, दूसर ओर कण के आकार। मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई अऊर फ्रीज-ड्राई इंसुलिन नैनोकणन मा काफी वृद्धि भै (तालिका 1)। यहि अध्ययन (तालिका 1) मा सब एनपी के पुनर्संयोजन के बाद पीडीआई अऊर ईई मा महत्वपूर्ण रूप से बदलाव नाहीं भा (पी > 0.05)। ई परिणाम बतावत है कि पुन: भंग होए के बाद अधिकांश कण बरकरार रहे। हालांकि, इंसुलिन ऑयल के भार के परिणामस्वरूप बहुत कम होइ गवा। लाइओफाइलाइज्ड अऊर स्प्रे-ड्राई मैनिटोल नैनोकण (तालिका 1)। यहिके विपरीत, मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई एनपी के इंसुलिन लोड सामग्री पहिले के तरह रही (तालिका 1)।
ई सर्वविदित है कि दवा वितरण उद्देश्यन के लिए उपयोग कीन जाय पर नैनोकणन के लोडिंग महत्वपूर्ण होत है। कम लोडिंग वाले एनपी के लिए, चिकित्सीय सीमा तक पहुँचै के लिए बहुत बड़ी मात्रा मा सामग्री के आवश्यकता होत है। हालांकि, इतनी उच्च एनपी सांद्रता के उच्च चिपचिपाहट मौखिक प्रशासन अऊर क्रमशः इंजेक्शन योग्य फॉर्मूलेशन मा असुविधा अऊर कठिनाई का कारण बनत है, 22 एनपी, इंसुलिन के अलावा। गोलियन अऊर चिपचिपा बायोफिल्म23, 24 बनावै के लिए भी उपयोग कीन जात है, जेहिमा कम लोडिंग स्तर पर बड़ी मात्रा मा एनपी के उपयोग के आवश्यकता होत है, जेकरे परिणामस्वरूप बड़ी गोलियां अऊर मोटी बायोफिल्म बनत हैं जवन मौखिक अनुप्रयोगन के लिए उपयुक्त नाहीं होत हैं। यहिसे, उच्च इंसुलिन भार वाले निर्जलित एनपी अत्यधिक वांछनीय हैं। हमार परिणाम बतावत हैं कि इंसुलिन-मुक्त इंसुलिन-सुखे एनपी स्प्रे का उच्च भार इन वैकल्पिक वितरण विधियन के लिए कईयो आकर्षक फायदा प्रदान कइ सकत हैं।
सब निर्जलित एनपी का तीन महीना तक रेफ्रिजरेटर मा रखा गा रहा। एसईएम परिणामन से पता चला कि तीन महीना के भंडारण के दौरान सब निर्जलित एनपी के आकृति विज्ञान मा महत्वपूर्ण बदलाव नाहीं भा (चित्र 4)। पानी मा पुनर्गठन के बाद, सब एनपी ईई मा मामूली कमी देखाइन अऊर तीन महीना के भंडारण अवधि के दौरान लगभग एक छोट मात्रा (~ 5%) इंसुलिन जारी किहिन (टी) 2).हालांकि, सब नैनोकणन के औसत कण आकार बढ़ गवा। मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई एनपी के कण आकार 525 एनएम तक बढ़ गवा, जबकि मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई अऊर फ्रीज-ड्राई एनपी का क्रमशः 872 अऊर 921 एनएम तक बढ़ गवा (तालिका 2)।
तीन महीना तक संग्रहीत विभिन्न निर्जलित इंसुलिन एनपी के आकृति विज्ञान: (क) मैनिटोल के साथ लाइओफाइलाइज्ड इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ख) मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई इंसुलिन नैनोकणन के एसईएम छवि; (ग) स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी के मैनिटोल एसईएम छवियन के बिना।
इसके अलावा, पुनर्गठित इंसुलिन नैनोकणों में अवक्षेप देखे गए थे, जो मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई और फ्रीज-ड्राई (चित्र S2) है। यह बड़े कणों के पानी में ठीक से निलंबित न होने के कारण हो सकत है। उपरोक्त सभी परिणाम दर्शाते हैं कि स्प्रे ड्राईंग तकनीक इंसुलिन नैनोकणों को इंसुलिन नैनोकणों के उच्च निर्जलीकरण और उच्च लोडिंग से बचा सकत है बिना कौनो भराव या क्रायोप्रोटेक्टेंट के प्राप्त कीन जात है।
निर्जलीकरण के बाद एंजाइमी पाचन के खिलाफ एनपी के सुरक्षात्मक क्षमता का प्रदर्शित करै के लिए पेप्सिन, ट्रिप्सिन अऊर α-काइमोट्रिप्सिन के साथ पीएच = 2.5 माध्यम मा इंसुलिन अवधारण का परीक्षण कीन गा रहा। निर्जलित एनपी के इंसुलिन अवधारण के तुलना ताजा तैयार एनपी के साथ कीन गा रहा, अऊर मुक्त इंसुलिन का नकारात्मक नियंत्रण के रूप मा उपयोग कीन गा रहा, ई अध्ययन मा इंसुलिन 4 h मा तेजी से उन्मूलन देखावा गा रहा। तीनों एंजाइमी उपचार (चित्र 5 ए-सी)। इसके विपरीत, मैनिटोल के साथ फ्रीज-ड्राई एनपी अऊर मैनिटोल के साथ या बिना स्प्रे-ड्राई एनपी के इंसुलिन उन्मूलन परीक्षण ने एंजाइमी पाचन के खिलाफ इन एनपी के काफी अधिक सुरक्षा दिखाई, जो ताजा तैयार इंसुलिन एनपी के समान रहा ( चित्र 1 पा- पेप्सिनोकण में सहायता)। ट्रिप्सिन, अऊर α-काइमोट्रिप्सिन, क्रमशः 50%, 60% अऊर 75% से अधिक इंसुलिन क्रमशः 4 घंटा के भीतर संरक्षित कीन जा सकत हैं (चित्र 5 ए-सी)। ई इंसुलिन-सुरक्षात्मक क्षमता रक्तप्रवाह मा उच्च इंसुलिन अवशोषण के संभावना का बढ़ा सकत है25। ई परिणाम बतावत हैं कि मैनिओल के साथ या बिना फ्रीजिंग मैनिनोल के साथ स्प्रे सुखावै से निर्जलीकरण के बाद एनपी के इंसुलिन-सुरक्षात्मक क्षमता का संरक्षित करब।
निर्जलित इंसुलिन एनपी के संरक्षण अऊर रिलीज व्यवहार: (क) पेप्सिन घोल मा इंसुलिन के संरक्षण; (ख) ट्रिप्सिन घोल मा इंसुलिन के सुरक्षा; (ग) α-काइमोट्रिप्सिन घोल द्वारा इंसुलिन का संरक्षण; (घ) पीएच = 2.5 घोल मा निर्जलित एनपी के रिलीज व्यवहार; (ई) पीएच = 6.6 घोल मा निर्जलित एनपी के रिलीज व्यवहार; (च) पीएच = 7.0 घोल मा निर्जलित एनपी के रिलीज व्यवहार।
ताजा तैयार अऊर पुनर्गठित सूखे इंसुलिन एनपी का 37 °C पर विभिन्न बफर (पीएच = 2.5, 6.6, 7.0) मा ऊष्मायन करा गा रहा, पेट, ग्रहणी अऊर ऊपरी छोटी आंत के पीएच वातावरण का अनुकरण करत हुए, इंसुलिन प्रतिरोध पर इंसुलिन के प्रभाव का जांच करै के लिए। अलग-अलग वातावरण मा रिलीज व्यवहार। जठरांत्र संबंधी पथ का टुकड़ा। पीएच = 2.5 पर, इंसुलिन-लोडेड एनपी अऊर रिज़ॉल्यूबिलाइज्ड ड्राई इंसुलिन एनपी ने पहिले एक घंटा के भीतर एक प्रारंभिक विस्फोट रिलीज देखाइस, जेकरे बाद अगले 5 घंटा मा धीमी रिलीज होइ (चित्र 5डी)। शुरुआत मा ई तेजी से रिलीज सबसे ज्यादा प्रोटीन के सतह के तेजी से विघटन के परिणाम के तरह होत है कि अणु कण के आंतरिक संरचना मा पूरी तरह से स्थिर। पीएच = 6.5 पर, इंसुलिन-लोड एनपी अऊर पुनर्गठित सूखा इंसुलिन एनपी 6 घंटा मा एक चिकनी अऊर धीमी रिलीज देखाइस, काहे से कि परीक्षण घोल का पीएच एनपी-तैयार घोल (चित्र 5 ई) के समान रहा। पीएच = 7 पर, एनपी लगभग दुई के साथ पूरा तरह से अविचलित अऊर अविचलित रहे। घंटे (चित्र 5एफ)। ई एहसे अहै काहे से कि काइटोसन का डिप्रोटोनेशन उच्च पीएच पर होत है, जेकरे परिणामस्वरूप कम कॉम्पैक्ट पॉलिमर नेटवर्क अऊर लोड इंसुलिन के रिलीज होत है।
इसके अलावा, मैनिटोल के बिना स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी अन्य निर्जलित एनपी (चित्र 5डी-एफ) के तुलना मा तेजी से रिलीज प्रोफाइल देखाइस। जैसा कि पहिले वर्णित है, मैनिटोल के बिना सुखाए गए पुनर्गठित इंसुलिन एनपी ने सबसे छोटा कण आकार देखावा। छोट कण एक बड़ा सतह क्षेत्र प्रदान करत हैं, यहै कारन प्रासंगिक दवा के अधिकांश दवा कण या कण के पास होई, जेकरे परिणामस्वरूप तेजी से रिलीज26.
एमटीटी परख द्वारा एनपी के साइटोटॉक्सिसिटी के जांच कीन गै रही। जैसा कि चित्र एस 4 मा देखा गा है, सब निर्जलित एनपी का 50-500 μg/ml के सांद्रता मा कोशिका व्यवहार्यता पर कौनो महत्वपूर्ण प्रभाव नाहीं पड़ा, जेसे पता चलत है कि सब निर्जलित एनपी का चिकित्सीय खिड़की तक पहुँचै के लिए सुरक्षित रूप से उपयोग कीन जा सकत है।
यकृत मुख्य अंग है जेकरे माध्यम से इंसुलिन आपन शारीरिक कार्य करत है। हेपजी 2 कोशिका एक मानव हेपेटोमा कोशिका रेखा है जेका आमतौर पर इन विट्रो हेपेटोसाइट अपटेक मॉडल के रूप मा उपयोग कीन जात है। इहाँ, हेपजी 2 कोशिका का उपयोग फ्रीज-ड्राईंग अऊर स्प्रे-ड्राईंग विधियन का उपयोग कइके निर्जलित एनपी के सेलुलर अपटेक का आकलन करै के लिए कीन जात रहा। साइटोमेट्री अऊर दृष्टि 25 μg/mL के सांद्रता मा मुफ्त एफआईटीसी इंसुलिन के साथ कई घंटे के ऊष्मायन के बाद, ताजा तैयार एफआईटीसी इंसुलिन-लोडेड एनपी अऊर बराबर इंसुलिन सांद्रता मा निर्जलित एफआईटीसी इंसुलिन-लोडेड एनपी क्वांटिटेटिव माइक्रोस्कोपी (सीएलएसएम) अवलोकन कीन गा रहें। ई परीक्षण। ताजा तैयार इंसुलिन-लोडेड एनपी, मैनिटोल के साथ लाइओफाइलाइज्ड एनपी अऊर मैनिटोल के साथ अऊर बिना स्प्रे-ड्राई एनपी (चित्र 6 ए) के इंट्रासेल्युलर प्रतिदीप्ति तीव्रता क्रमशः मुक्त इंसुलिन समूह से 4.3, 2.6, 2.4 अऊर 4.1 गुना अधिक रही। परिणाम बतावत हैं कि संलग्न इंसुलिन मुक्त इंसुलिन के तुलना मा सेलुलर अपटेक मा अधिक शक्तिशाली है, मुख्य रूप से अध्ययन मा उत्पादित इंसुलिन-लोडेड नैनोकणन के छोट आकार के कारण।
ताजा तैयार एनपी अऊर निर्जलित एनपी के साथ 4 घंटा ऊष्मायन के बाद हेपजी 2 कोशिका अवशोषण: (क) हेपजी 2 कोशिका द्वारा एफआईटीसी-इंसुलिन अवशोषण का वितरण। (ख) प्रवाह साइटोमेट्री (एन = 3) द्वारा विश्लेषण कीन गा प्रतिदीप्ति तीव्रता का ज्यामितीय माध्य, * मुक्त इंसुलिन के साथ तुलना मा पी <0.05।
इसी तरह, सीएलएसएम छवियन से पता चला कि ताजा तैयार एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड एनपी अऊर एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड स्प्रे-ड्राई एनपी (बिना मैनिटोल के) के एफआईटीसी प्रतिदीप्ति तीव्रता अन्य नमूनों (चित्र 6 ए) के तुलना मा बहुत मजबूत रहीं। इसके अलावा, मैनिसोल के जोड़े के साथ, घोल के उच्च चिपचिपाहट बढ़ जात है। कोशिकीय अवशोषण के लिए, जेकरे परिणामस्वरूप इंसुलिन प्रसार में कमी आई। ई परिणाम बतावत हैं कि मैनिटोल-मुक्त स्प्रे-सूखे एनपी सबसे अधिक सेलुलर अवशोषण दक्षता प्रदर्शित करत हैं काहे से कि पुन: विघटन के बाद ओनके कण आकार फ्रीज-सूखे एनपी के तुलना मा छोट रहा।
काइटोसन (औसत आणविक भार 100 केडीए, 75-85% डीएसिटाइलेटेड) सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदा गा रहा। (ओकविले, ओंटारियो, कनाडा)। सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट (टीपीपी) वीडब्ल्यूआर (रैडनर, पेंसिल्वेनिया, यूएसए) से खरीदा गा रहा। ई अध्ययन मा पुनः संयोजक इंसुलिन का उपयोग इंसुलिन साइंटिफिक (साइंटिफिक साइंस, एमए, एमए) से कीन गा रहा। यूएसए)।फ्लोरोसेसिन आइसोथियोसाइनेट (एफआईटीसी)-लेबल मानव इंसुलिन अऊर 4′,6-डायमिडिनो-2-फेनिलिंडोल डाइहाइड्रोक्लोराइड (डीएपीआई) सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदा गा रहा। (ओकविले, ओंटारियो, कनाडा)। हेपजी 2 सेल लाइन एटीसीसी (मैनसास, वर्जीनिया, वर्जीनिया) से प्राप्त कीन गा रहा। विश्लेषणात्मक दुसरे या विश्लेषणात्मक वर्जीनिया। स्रेनी।
0.1% एसिटिक एसिड युक्त डबल डिस्टिल्ड वाटर (डीडी वाटर) मा घोल के 1 मिलीग्राम/एमएल सीएस घोल तैयार करा। क्रमशः डीडी पानी अऊर 0.1% एसिटिक एसिड मा घोल के टीपीपी अऊर इंसुलिन के 1 मिलीग्राम/एमएल घोल तैयार करा। पूर्व-इमल्शन एक पॉली स्ट्रोजर PCU-0.10-0.10 उच्च गति वाले होंजर के साथ तैयार कीन गा रहा। (ब्रिंकमैन इंड. वेस्टबरी, एनवाई, यूएसए)।तैयारी प्रक्रिया निम्नलिखित है: सबसे पहिले, 2 मिलीलीटर टीपीपी घोल का 4 मिलीलीटर इंसुलिन घोल मा मिलावा जात है, अऊर मिश्रण का 30 मिनट तक हिलावा जात है अऊर पूरा तरह से मिलावा जात है। फिर, मिश्रित घोल का एक सिरिंज के माध्यम से सीएस घोल मा बूंद-बूंद मिलावा जात है (100 आरपीएम)। मिश्रणन का 30 मिनट के लिए बर्फ के स्नान मा उच्च गति के सरगर्मी (15,000 आरपीएम) के तहत रखा गा रहा, अऊर ओनका क्रॉस-लिंक्ड इंसुलिन एनपी प्राप्त करै के लिए एक निश्चित पीएच मा समायोजित कीन गा रहा। इंसुलिन एनपी के कण आकार का अउर समरूप बनावै अऊर कम करै के लिए, ओनका सोनिकेटर प्रकार के उपयोग करत हुए एक बर्फ के स्नान मा अतिरिक्त 30 मिनट के लिए सोनिकेट कीन गा रहा (2000 आरपीएम) हिल्शर अल्ट्रासोनिक्स, टेल्टो, जर्मनी)।
इंसुलिन एनपीएस का परीक्षण जेड-औसत व्यास, पॉलीडिस्पर्सिटी इंडेक्स (पीडीआई) अऊर ज़ीटा विभव के लिए डायनेमिक लाइट स्कैटरिंग (डीएलएस) माप का उपयोग कइके एक लाइटसाइजर 500 (एंटन पार, ग्राज़, ऑस्ट्रिया) का उपयोग कइके 25°C पर डीडी पानी मा पतला कइके कीन गा रहा। आकृति विज्ञान अऊर आकार वितरण का एक माइक्रोस्कोप इलेक्ट्रोस्कोन ट्रांसमिशन द्वारा चिन्हित कीन गा रहा। (टीईएम) (हिताची, टोक्यो, जापान), अऊर छवियन का बाद मा हिताची इमेजिंग सॉफ्टवेयर (हिताची, टोक्यो, जापान) का उपयोग कइके विश्लेषण कीन गा रहा। इंसुलिन एनपी के एनकैप्सुलेशन दक्षता (ईई) अऊर लोडिंग क्षमता (एलसी) का आकलन करै के लिए, एनपी का अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब मा पिपेट कीन गा रहा, जेहिमा 10 सेंटीमीटर के आणविक भार कटौती के साथ अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब मा डाला गा रहा। 500 xg 30 मिनट के लिए। फिल्ट्रेट मा अनकैप्सुलेटेड इंसुलिन का एक एजिलेंट 1100 सीरीज एचपीएलसी सिस्टम (एजिलेंट, सांता क्लारा, कैलिफोर्निया, यूएसए) का उपयोग कइके मापा गा रहा, जेहिमा एक क्वाटरनरी पंप, ऑटोसैम्पलर, कॉलम हीटर अऊर डीएडी डिटेक्टर शामिल रहे। इंसुलिन का विश्लेषण एक C18ZBax, कॉलम, 35 μm, μm द्वारा कीन गा रहा। × 150 मिमी, एजिलेंट, यूएसए) अऊर 214 एनएम पर पता लगावा गा रहा। मोबाइल चरण एसीटोनाइट्रिल अऊर पानी रहा, जेहिमा 0.1% टीएफए, ढाल अनुपात 10/90 से 100/0 तक रहा, अऊर 10 मिनट तक चलावा गा रहा। मोबाइल चरण का 10/90 मिनट के प्रवाह दर से पंप कीन गा रहा। 20 °C. समीकरणन का उपयोग कइके ईई अऊर एलसी के प्रतिशत के गणना करा। (1) अऊर समीकरण (2)।
इंसुलिन एनपी का अनुकूलित करै के लिए 2.0 से 4.0 तक के विभिन्न सीएस/इंसुलिन अनुपात का परीक्षण कीन गा रहा। तैयारी के दौरान सीएस घोल के अलग-अलग मात्रा जोड़ा गा रहा, जबकि इंसुलिन/टीपीपी मिश्रण का स्थिर रखा गा रहा। सब घोल (ट्यूलिन, ट्यूलिन, पीपी सीएस)। इंसुलिन नैनोकणन के ईई अऊर कण आकार का अलग-अलग पीएच मान अऊर सीएस/इंसुलिन द्रव्यमान अनुपात मा इंसुलिन एनपी के गठन का अनुकूलित करै के लिए मूल्यांकन कीन गा रहा।
अनुकूलित इंसुलिन एनपी का एल्यूमीनियम कंटेनर पर रखा गा रहा अऊर कुछ टेप से कस के ऊतक से ढका गा रहा। बाद मा, पेंच वाले कंटेनर का एक ट्रे ड्रायर से सुसज्जित लैबकोन्को फ्रीज़ोन फ्रीज ड्रायर (लैबकोन्को, कैनसस सिटी, एमओ, यूएसए) मा रखा गा रहा। तापमान अऊर वैक्यूम दबाव -100 °C, टोर पर सेट कीन गा रहा। सूखे इंसुलिन एनपी प्राप्त करै के लिए पहिले 2 घंटा के लिए, अऊर 24 घंटा के शेष 22 घंटा के लिए 0 °C अऊर 0.120 टोर।
बुची मिनी स्प्रे ड्रायर बी-290 (बुची, फ्लाविल, स्विट्जरलैंड) का उपयोग कैप्सूलित इंसुलिन उत्पन्न करै के लिए कीन गा रहा। चयनित सुखाने के पैरामीटर रहे: तापमान 100 °C, फीड फ्लो 3 एल/मिनट अऊर गैस फ्लो 4 एल/मिनट।
निर्जलीकरण से पहिले अऊर बाद मा इंसुलिन एनपी का एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग कइके चिन्हित कीन गा रहा। निर्जलित नैनोकणन के साथ-साथ मुक्त इंसुलिन अऊर चिटोसन का स्पेक्ट्रम 100 एफटीआईआर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (पर्किनएलमर, वाल्थम, मैसाचुसेट्स, यूएसए) का उपयोग कइके विश्लेषण कीन गा रहा जवन एक सार्वभौमिक एटीआर नमूना (पर्किनल्मर, वाल्थम, वाल्थम, मैसाचुसेट्स, यूएसए)।4000-600 सेमी2 के आवृत्ति सीमा मा 4 सेमी2 के रिज़ॉल्यूशन पर 16 स्कैन से सिग्नल औसत प्राप्त कीन गा रहा।
सूखे इंसुलिन एनपी के आकृति विज्ञान का आकलन फ्रीज-ड्राई अऊर स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी के एसईएम छवियन द्वारा कीन गा रहा, जेका हेलियोस नैनोलैब 650 फोकस्ड आयन बीम-स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (एफआईबी-एसईएम) (एफईआई, हिल्सबोरो, ओरेगन, यूएसए) द्वारा कैप्चर कीन गा रहा। उपयोग कीन गा मुख्य पैरामीटर वोल्टेज 5 केवी अऊर करंट 30 एमए रहा।
सब निर्जलित इंसुलिन एनपी का डीडी पानी मा फिर से घुलावा गा रहा। निर्जलीकरण के बाद ओनके गुणवत्ता का आकलन करै के लिए पहिले बताई गई विधि का उपयोग कइके कण आकार, पीडीआई, ईई अऊर एलसी का फिर से परीक्षण कीन गा रहा। लंबे समय तक भंडारण के बाद एनपी के गुणन के परीक्षण कइके एनहाइड्रोइंसुलिन एनपी के स्थिरता का भी मापा गा रहा। यहि अध्ययन मा, निर्जलीकरण के बाद सब एनपी का तीन रेफ्रिजरेटर मा संग्रहीत कीन गा रहा। महीना। भंडारण के तीन महीना के बाद, एनपी का रूपात्मक कण आकार, पीडीआई, ईई अऊर एलसी के लिए परीक्षण कीन गा रहा।
इंसुलिन के सुरक्षा के प्रभावकारिता का मूल्यांकन करै के लिए नकली गैस्ट्रिक द्रव (पीएच 1.2, 1% पेप्सिन युक्त), आंत द्रव (पीएच 6.8, 1% ट्रिप्सिन युक्त) या काइमोट्रिप्सिन घोल (100 ग्राम / एमएल, फॉस्फेट बफर में, पीएच78) युक्त 45 एमएल में पुनर्गठित एनपी के 5 एमएल का घोलौ। निर्जलीकरण के बाद एनपी। ओनका 100 आरपीएम के आंदोलन गति के साथ 37°C पर ऊष्मायन करा गा रहा। 500 μL घोल का अलग-अलग समय बिंदुओं पर एकत्र कीन गा रहा अऊर इंसुलिन सांद्रता एचपीएलसी द्वारा निर्धारित कीन गा रहा।
ताजा तैयार अऊर निर्जलित इंसुलिन एनपी के इन विट्रो रिलीज व्यवहार का डायलिसिस बैग विधि (आणविक भार कट-ऑफ 100 केडीए, स्पेक्ट्रा पोर इंक) द्वारा परीक्षण कीन गा रहा। ताजा तैयार अऊर पुनर्गठित सूखे एनपी का पीएच 2.5, पीएच 6.6, अऊर पीएच 7.0 (एम. 1.00, फ़ोफ़ोलिन सैफरेड) पर तरल पदार्थन मा डायलिसिस कीन गा रहा। पीबीएस) क्रमशः पेट, ग्रहणी अऊर ऊपरी छोटी आंत के पीएच वातावरण का अनुकरण करै के लिए। सब नमूना 200 आरपीएम पर लगातार हिलावै के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन कीन गा रहें। 5 एमएल डायलिसिस बैग के बाहर तरल पदार्थ का निम्नलिखित समय पर आकर्षित करा: 0.5, 1, 2, 34, 6, अऊर तुरंत आयतन के साथ फिर से भरौ डायलिसेट। द्रव मा इंसुलिन संदूषण का एचपीएलसी द्वारा विश्लेषण कीन गा रहा, अऊर नैनोकणन से इंसुलिन रिलीज के दर का गणना नैनोकणन मा संलग्न कुल इंसुलिन के लिए मुक्त इंसुलिन के अनुपात से गणना कीन गा रहा (समीकरण 3)।
मानव हेपेटोसेल्युलर कार्सिनोमा सेल लाइन हेपजी 2 कोशिका डुलबेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम) का उपयोग कइके 60 मिमी व्यास के व्यंजन मा उगावा गा रहा जेहिमा 10% भ्रूण गोजातीय सीरम, 100 आईयू / एमएल पेनिसिलिन अऊर 100 μg / एमएल स्ट्रेप्टोमिसिन 297°C पर बनाए रखा गा रहा। 95% सापेक्ष आर्द्रता, अऊर 5% CO2। अवशोषण परख के लिए, HepG2 कोशिकाओं का 1 × 105 कोशिका / मिलीलीटर पर 8-वेल Nunc लैब-टेक चैम्बर स्लाइड सिस्टम (थर्मो फिशर, एनवाई, यूएसए) पर बीज कीन गा रहा। साइटोटॉक्सिसिटी परख के लिए, ओनका 96-Corwellning प्लेट (NY, USA, USA) मा बोवा गा रहा। × 104 कोशिका/एमएल के घनत्व पर।
एमटीटी परख का उपयोग ताजा तैयार अऊर निर्जलित इंसुलिन एनपीएस 30 के साइटोटॉक्सिसिटी का मूल्यांकन करै के लिए कीन गा रहा। एचईपीजी 2 कोशिका का 5 × 104 कोशिका/एमएल के घनत्व मा 96-वेल प्लेट मा बोवा गा रहा अऊर परीक्षण से पहिले 7 दिन तक संवर्धित कीन गा रहा। इंसुलिन एनपी का विभिन्न सांद्रता (50 से 50 माइक्रोग्राम) तक पतला कीन गा रहा अऊर माध्यम मा संवर्धन कीन गा रहा। फिर कोशिकाओं का प्रशासित कीन गा। ऊष्मायन के 24 घंटा के बाद, कोशिका का पीबीएस से 3 बार धोवा गा अऊर अतिरिक्त 4 घंटा के लिए 0.5 मिलीग्राम/एमएल एमटीटी युक्त माध्यम के साथ ऊष्मायन करा गा। साइटोटॉक्सिसिटी का आकलन पीले टेट्राज़ोलियम एमटीटी के एंजाइमी कमी का माप के माप के कीन गा रहा। एम200 प्रो स्पेक्ट्रोफोटोमीटर प्लेट रीडर (टेकन, मैनेडोर्फ, स्विट्जरलैंड)।
एनपी के सेलुलर अपटेक दक्षता का कन्फोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी अऊर फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण द्वारा परीक्षण कीन गा रहा। नंक लैब-टेक चैम्बर स्लाइड सिस्टम के प्रत्येक कुँआ का मुफ्त एफआईटीसी-इंसुलिन, एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड एनपी के साथ इलाज कीन गा रहा, अऊर 25 μg/mL निर्जलित एनपीटीसी-इंसुलिन के एकै सांद्रता मा पुनर्गठित कीन गा रहा। 4 घंटे। कोशिकाओं का पीबीएस से 3 बार धोवा गा रहा अऊर 4% पैराफॉर्मेल्डिहाइड से तय कीन गा रहा। नाभिक का 4′,6-डायमिडिनो-2-फेनिलिंडोल (डीएपीआई) से दाग दीन गा रहा। इंसुलिन स्थानीयकरण ओलिंपस एफवी1000 लेजर स्कैनिंग/दुई-फोटॉन माइक्रोस्कोप (ओम्पस, टोक्यो सिटी, टोक्यो, सिटी) का उपयोग कइके देखल गै रहा। जापान)।फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए, 10 μg/mL मुक्त FITC-इंसुलिन, FITC-इंसुलिन-लोडेड NPs, अऊर रिज़ॉल्यूबिलाइज्ड डिहाइड्रेटेड FITC-इंसुलिन NPs के समान सांद्रता का HepG2 कोशिका के साथ बीजित 96-वेल प्लेट मा जोड़ा गा रहा अऊर 4 घंटा तक ऊष्मायन कीन गा रहा। एफबीएस के साथ.5 × 104 कोशिका प्रति नमूना एक बीडी एलएसआर II प्रवाह साइटोमीटर (बीडी, फ्रैंकलिन लेक्स, न्यू जर्सी, संयुक्त राज्य अमेरिका) द्वारा विश्लेषण कीन गा रहा।
सब मान औसत ± मानक विचलन के रूप मा व्यक्त कीन जात हैं। सब समूहन के बीच तुलना का आकलन मैक (आईबीएम, एंडिकॉट, न्यूयॉर्क, यूएसए) के लिए आईबीएम एसपीएसएस सांख्यिकी 26 द्वारा एक तरफा एनोवा या टी-टेस्ट का उपयोग कइके कीन गा रहा अऊर पी <0.05 का सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गा रहा।
ई अध्ययन थोक एजेंट या क्रायोप्रोटेक्टेंट क्षमता अऊर उच्च लोड क्षमता का उपयोग करत हुए मानक फ्रीज-ड्राईंग विधियन के तुलना मा बेहतर पुनर्गठन के साथ क्रॉस-लिंक्ड काइटोसन / टीपीपी / इंसुलिन नैनोकणन का निर्जलित करै के लिए स्प्रे ड्राईंग के लचीलापन अऊर क्षमता का दर्शाता है। अनुकूलित इंसुलिन नैनोकणन ने औसतन कण आकार अऊर 18 n 99.4% के एनकैप्सुलेशन दक्षता। निर्जलीकरण के बाद एसईएम अऊर एफटीआईआर परिणामन से पता चला कि गोलाकार संरचना केवल मैनिटोल के साथ अऊर बिना स्प्रे-ड्राई एनपी मा बनाए रखी गै रही अऊर मैनिटोल के साथ लाइओफाइलाइज्ड रही, लेकिन मैनिटोल के बिना लाइओफाइलाइज्ड एनपी निर्जलीकरण के दौरान विघटित होइ गै रहीं। पुनर्गठन पर सबसे छोट औसत कण आकार अऊर सबसे अधिक लोडिंग देखाइस। इन सब निर्जलित एनपी के रिलीज व्यवहार से पता चला कि उ पीएच = 2.5 अऊर पीएच = 7 के घोल मा तेजी से जारी कीन गा रहें, अऊर पीएच = 6.5 के घोल मा बहुत स्थिर रहें। अन्य पुन: भंग निर्जलित एनपी के तुलना मा, एनपीएस स्प्रे-स्प्रे बिना मैन टीटी के परिणाम तेजी से देखाइस। सेलुलर अपटेक परख मा देखे गए के अनुरूप है, काहे से कि मैनिटोल के अभाव मा स्प्रे-ड्राई एनपी ने लगभग पूरी तरह से ताजा तैयार एनपी के सेलुलर अपटेक दक्षता का बनाए रखिन। ई परिणाम बतावत हैं कि मैनिटोल-मुक्त स्प्रे ड्राईंग द्वारा तैयार सूखा इंसुलिन नैनोकण आगे के प्रसंस्करण के लिए सबसे उपयुक्त हैं, जइसे कि अन्य हाइड्रोज, जैसे कि गोली या बायोएडहेसिव फिल्म।
बौद्धिक संपदा मुद्दन के कारण, वर्तमान अध्ययन के दौरान उत्पन्न अऊर/या विश्लेषण कीन गा डेटासेट सार्वजनिक रूप से उपलब्ध नाहीं हैं, लेकिन उचित अनुरोध पर संबंधित लेखकन से उपलब्ध हैं।
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